【摘 要】
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为确定霍乱弧菌分型噬菌体受体相关的基因,该研究以霍乱弧菌N16961为出发菌株,采用转座子插入法,筛选获得8株霍乱弧菌分型噬菌体抗性(不裂)的转座突变株.其中突变株M8为分型
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为确定霍乱弧菌分型噬菌体受体相关的基因,该研究以霍乱弧菌N16961为出发菌株,采用转座子插入法,筛选获得8株霍乱弧菌分型噬菌体抗性(不裂)的转座突变株.其中突变株M8为分型噬菌体VP2、VP3和VP4抗性,其余为VP3抗性.选取针对VP3抗性的突变株M15,Southern杂交鉴定转座子为单一拷贝的插入,表明VP3的抗性与转座子插入具有因果关系.在转座子上设计引物,利用反向PCR技术,扩增转座子插入位点旁侧N16961染色体序列.对扩增产物直接进行测序,并将测序结果提交GeneBank进行网上同源性比较,确定了插入位点处的染色体序列,该处结构基因的表达产物为前脂蛋白乙二酰转移酶(Lgt).分析Lgt的序列特征和功能,Lgt是一种负责修饰脂蛋白N-末端半胱氨酸残基的酶,前脂蛋白是细菌细胞表面的蛋白分子,Lgt的缺失可能影响到前脂蛋白的表达,因此认为Lgt可能是分型噬菌体VP3的受体相关基因.同时利用反式互补,将携带有Lgt完整结构基因的载体电击转入M15,结果噬菌体抗性转座突变体M15重新恢复了对VP3的敏感性.反式互补验证了Lgt是分型噬菌体VP3的受体相关基因.
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