论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(HBV)是一个高度变异的病毒,产生了不同的基因型(genotype)、血清型(serotype)和准种(quasispecies)等基因序列异质性的特点。HBV的基因异质性和临床的关系一直是近年来的研究热点。 目的:首次调查福建省HBV基因型的分布状况以及HBV基因型与HBV相关肝病临床的可能相关性;同时对临床上常用的三种检测YMDD突变株的方法进行比较,探寻一种能够准确、敏感、快速有效地检测出YMDD突变株的实验方法,为研究HBV基因型与拉米夫定治疗慢乙肝的疗效提供可靠的方法学。 方法: 1.采集了福州市、厦门市、泉州市、三明市、莆田市等五个地区慢性HBV感染者的血清,应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测HBV基因型。 2.应用熔解曲线法和PCR微板核酸杂交-ELISA法对44例接受拉米夫定治疗过程中出现病毒学反跳时的血清进行YMDD突变株的检测,并与测序法和mPCR-RFLP法比较它们的敏感性、一致性。 结果: 1.443份HBV DNA阳性的血清中基因B型275例(62.1%),C型100例(22.6%),D型及其混合型共51例(11.5%)。基因A型12例(2.7%),仅见于福州、莆田两地,且莆田地区明显高于福州(即10.6%vs. 2.6%,X~2=7.1,P=0.008)。本研究未发现E、F型。 2.对应分析显示,无症状携带者、慢性肝炎、重型肝炎中基因B型所占福建医科大学2000级硕士研究生毕业论文中文摘要比例明显高于肝硬化和原发性肝癌(HCC)组(P<0.05);C型在肝硬化中所占比例显著高于其它疾病组(P<0.05);HCC与基因D型及其混合型关系密切。 3.基因D型患者e抗原阳性率显著低于B型、C型和混合型(分别是30.8%vs.59.6%,xZ一8.1,P=0.005:30.8%vs.56%,xZ二5.3,P=0.022:30.8%vs.60%,xZ二4 .5,P二0.03)。 4.mpeR一RFLP法检出HBv oNA的敏感性(lo4eopies/m一)>PeR微板核酸杂交一ELxsA法(一。,copies/mz)>熔解曲线法(zo6eopies/ml)。 5.44份出现病毒学反跳的血清,用mPCR一盯LP法检测26例为YMDD突变株,18例为野生株。在这26例突变株中,熔解曲线法检出16例,PCR微板核酸杂交一ELISA法检出18例;而在18例野生株中,熔解曲线法检出2例突变株,PCR微板核酸杂交一ELISA法检出13例突变株。将上述三种方法检测结果不一致的16例标本作DNA序列测定,mPCR一RFLP法、熔解曲线法和PCR微板核酸杂交一ELIsA法与测序的符合率分别为93.8%(15/16)、43.8%(7/16)、2 8.80;0(3/一6)(xZ二15.7,P<0001)。 结论: 1.福建省HBV感染以基因B型为主,其次是C型,也存在基因D型的流行。 2.基因A型在福建的分布可能具有区域性特征,还需扩大样本例数进一步验证。 3.基因型B与重型肝炎的发展有关;基因C型更易导致肝硬化。 4.基因D型与HCC可能有一定的相关性,值得进一步研究。 5.mPcR一RFLP法检测YMDD突变株具有较好的可靠性和可行性,是监测拉米夫定耐药株的一种非常有效的方法;熔解曲线法和PCR微板核酸杂交法需要进一步完善以提高敏感性和特异性。