【摘 要】
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该论文根据代谢工程理论,重点研究了过量合成核黄素的枯草芽孢杆菌的基因工程及其碳代谢的全局调节机理,得到如下结果:B.subtilis 核黄素生物合成的限制因素不在于5-磷酸核酮
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该论文根据代谢工程理论,重点研究了过量合成核黄素的枯草芽孢杆菌的基因工程及其碳代谢的全局调节机理,得到如下结果:B.subtilis 核黄素生物合成的限制因素不在于5-磷酸核酮糖及3-磷酸甘油酸等前体物的供给,也不是还原力NADPH的供给,而在于以鸟苷三磷酸为起始物的生物合成途径中核黄素操纵子的基因剂量及ATP的供给.用吖啶橙及提高培养温度法不能消除B.subtilis 24/pMX45中的质粒,SDS对B.subtilis 24/Pmx45 质粒的消除率为4.1﹪,原生质体再生法的质粒消除率为12﹪.以Pbe2为载体,所构建的带有4.6kb核黄素操纵子的重组质粒pRF46在E.coliHB101中成功表达.将SMMP高渗缓冲液中的Mg<'2+>用50mM的Ca<'2+>取代并将pH调至7,煮沸原生质体悬浮液1min,可降低B.subtilis24A7原生质体核酸酶活性.葡萄糖的吸收及磷酸化大多由B.subtilis基因ptsG编码的葡萄糖透性酶EII完成,分别编码EI与HPr的ptsl及ptsH形成组成型表达的操纵子.B.subtilis 的碳分解代谢阻遏受分解代谢调节蛋白A(CcpA)及具有顺式作用的分解代谢响应元件的调控.当葡萄糖浓度大于3﹪时,B.subtilis核黄素发酵出现葡萄糖分解代谢阻遏效应,并引起代谢流迁移.发酵液的低pH值抑制了核黄素合成酶的活性,核黄素产量增加缓慢.
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