犬瘟热（Canine Distemper）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus,CDV）引起犬和肉食目中许多动物的一种高度接触性传染病。该病的传染性强，发病率高，本病诊断比较困难，传统的检测方法在灵敏性和特异性上存在一定局限性。另外,在犬瘟热弱毒疫苗广泛应用的背景下，大多数犬的血清对犬瘟热病毒呈阳性反应。犬瘟热是对实验用犬危害最大的病毒病之一。建立现代实验动物微生物学质量监测体系基本原则是对该病必须同时包括检测病原体和检测抗体两个方面，本实验包括建立了检测犬瘟热病原体的RT-PCR方法和检测抗体的ELISA方法，两种检测方法互相补充，综合判定结果。研究工作可分为2个部分： 第一部分犬瘟热病毒间接ELISA法检测技术的建立与初步应用 采用RT-PCR法扩增出犬瘟热病毒标准疫苗株的融合蛋白基因（F基因）片段约1499bp，核衣壳蛋白基因（N基因）片段约825bp克隆到pMD18-T载体。酶切鉴定后用一对特异性的引物扩增约732bp的F蛋白基因片段、830bp的N蛋白基因片段。这两个基因定向克隆到原核表达载体pET-28a（+）中后，重组质粒转化到宿主菌BL21中，在37℃ 1.0mM IPTG诱导下，F蛋白基因、N蛋白基因片段获得了良好表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，结果显示其表达的融合蛋白大小分别为28KDa、33KDa，与预期值相符。诱导条件的改变（IPTG的浓度改变）对表达量影响不大。Western印迹显示表达产物能被CDV抗体特异性识别，实验结果表明这两种重组蛋白保留了天然蛋白的部分抗原性，为进一步研究犬瘟热病毒及其检测方法奠定基础。利用pET-28a的 His·Tag，使目的蛋白得到较好的纯化。简易的棋盘滴定法确定抗原包被浓度：F蛋白为10μg/ml，N蛋白5μg/ml，以此建立间接ELISA法。用ELISA法检测20份样品血清两种蛋白的检测结果符合率为100％。另外对血清做一系列浓度稀释，从中得出以F蛋白为抗原，样品血清的平均稀释度为1：1025；以N蛋白为抗原，样品血清的平均稀释度为1：2630。 第二部分犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用 本研究通过特异性扩增CDV核蛋白基因保守序列，建立了检测CDV核酸的RT-PCR法。用NDV、CPV、PRV、IBV进行特异性试验，结果显示该方法有较好的特异性。RT-PCR检测的20份血样中阳性、阴性结果与临床试纸法检测结果相同，而9份试纸检测为可疑的样品中有4份为阳性。结果表明该方法的灵敏性与特异性较高。 本研究成功地建立了检测样品血清中CDV抗体的ELISA方法与检测样品中CDV抗原的RT-PCR方法，为探索建立实验动物微生物学质量监测体系打下基础。