农杆菌介导的草坪草遗传转化研究

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本实验以高羊茅和多年生黑麦草成熟种子为材料,研究了影响其植株再生的若干因素,建立了农杆菌介导的遗传转化体系。获得的主要研究结果如下: 1 不同生长激素种类和浓度的诱导培养基,对多年生黑麦草和高羊茅的组织培养产生不同影响,结果发现,dicamba作为生长激素的效果要好于2,4-D;以2,4-D为生长激素时,在9 mg l-l的浓度范围内,随着2,4-D浓度的增加,植株再生率呈上升的趋势:在5 mg l-1dicamba和5 mg l-12,4-D的处理中加入1 mg l-1 NAA对植株再生率的影响不大。 2 低浓度的6-BA(0.1mg l-1)可以提高高羊茅的植株再生率,而高浓度的6-BA显著抑制愈伤组织的产生,而使高羊茅植株的再生率降低。 3 在诱导培养基中加入2mg l-1ABA显著抑制芽的生长和愈伤组织的产生,对高羊茅的植株再生产生负面影响。 4 比较了三种基本培养基有机营养成分对高羊茅组织培养的影响,结果发现,B5有机营养成分效果最佳,M8有机营养成分次之,而MS有机营养成分效果最差。 5 低浓度的脯氨酸、谷氨酰胺和水解酪蛋白(100 mg l-1)有利于提高高羊茅的植株再生率,而高浓度则起反作用。 6 在多年生黑麦草的组织培养中发现,蔗糖代替麦芽糖作为碳源,有利于提高多年生黑麦草的植株再生率。 7 在遗传转化中发现,在分化培养基中加入50 mg l-1的潮霉素,可以提高对转化细胞的筛选效率。 8 建立了多年生黑麦草和高羊茅的遗传转化体系,通过这套体系获得了46株多年生黑麦草和7株高羊茅的再生植株,其中6株多年生黑麦草和1株高羊茅为PCR阳性。
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