论文部分内容阅读
目的:本文是采用微生物发酵转化技术对中药黄芩进行生物转化,为黄芩的深入开发和利用提供实验数据。方法:1、通过筛选得到能够水解黄酮苷中β-葡萄糖醛酸键的菌种。2、通过考察单因素试验,并在单因素试验基础上,设计L9（34）正交试验,优化黄芩固体发酵方法。3、考察不同碳源、氮源、无机盐的影响,并考察选取的氮源和无机盐的不同浓度对黄芩液体发酵的影响;以及考察发酵时间、装样量、转速、PH、液料比等因素,来确定黄芩液体发酵的最佳工艺。4、溶剂提取法考察发酵样品的提取条件,再联合考察优化大孔吸附树脂法,建立从黄芩发酵样品中提取分离发酵转化产物的方法。利用TLC、HPLC及1H-NMR、13C-NMR和LC-MS鉴定黄芩转化产物。结果:1、纳豆菌能水解黄芩苷和汉黄芩中β-葡萄糖醛酸生成苷元黄芩素和汉黄芩素。2、对液体和固体发酵工艺进行对比,确定了更适宜发酵黄芩的固体发酵方法,并得到了最适发酵条件:纳豆菌种于180r/min培养12h后,接种于粉碎过40目的黄芩,液料比3:1,接种量30%,培养温度37℃,发酵时间7d。发酵后黄芩样品中黄芩苷转化率为96.5%,汉黄芩苷的转化率为98.6%。3、用溶剂法提取黄芩发酵样品,黄芩素提取率为79%,汉黄芩素提取率为76%。经过试验优化得到大孔树脂分离纯化条件:大孔吸附树脂D101,上柱速度2BV/h,上柱液浓度(黄芩素2.47mg·mL-1,汉黄芩素0.57 mg·mL-1),上柱液PH值为5,60%乙醇洗脱黄芩素,80%乙醇洗脱汉黄芩素,洗脱速度3BV/h,径高比1:7,比吸附量为32.6mg/g。通过TLC、HPLC及1H-NMR、13C-NMR、LC-MS鉴定发酵黄芩的2个转化产物分别为苷元黄芩素和汉黄芩素,且分离纯化的黄芩素纯度97%,汉黄芩素纯度为98.6%。结论:根据以上试验结果可以确定纳豆菌作为中药黄芩的发酵菌种,具有高效,专一的特点。使用固体发酵方法对黄芩进行发酵转化,提升了转化产物的含量;通过溶剂提取法与大孔吸附树脂联合作用,分离纯化得到转化产物黄芩素、汉黄芩素。本文确定了黄芩生物转化及提取分离的方法,该方法稳定可行,条件简便,提升了黄芩的生理活性和药用价值。通过微生物转化中药黄芩,对黄芩的继续开发和利用起到一定推动作用。