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目的: 观察尼古丁对T淋巴细胞亚群CD4+细胞和CD8+细胞分化的影响,以及对CD4+细胞中Th1、Th2细胞分化的影响,为尼古丁对免疫系统的作用提供进一步的证据。方法:(1)20只6-8周的BALB/C雌性小鼠随机分为4组:对照组、1.5mg组、3.0 mg组和6.0 mg组。对照组小鼠腹部皮下注射生理盐水溶液,另三组分别按1.5mg/kg,3.0 mg/kg ,6.0 mg/kg注射尼古丁溶液,均连续注射3周;无菌取小鼠脾脏,不锈钢网制备脾细胞溶液,尼龙棉柱法分离T淋巴细胞;分别加入Thy-1-FITC抗体,CD4-FITC抗体和CD8-PE抗体,流式细胞仪检测并分析T细胞的分离率及CD4+细胞与CD8+细胞的比值;(2)使用Mouse Th1/Th2 Cytokine CBA试剂盒检测血浆样品中5种细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α的浓度。(3)抽提T淋巴细胞总RNA,设计以上五种细胞因子的特异引物,RT-PCR法扩增特异片段,琼脂糖凝胶电泳并照相,凝胶分析系统分析结果。结果:(1)T淋巴细胞的分离率在78.53%-83.66%之间,即应用尼龙棉柱法分离T淋巴细胞可达到80%左右的分离率;对T淋巴细胞中CD4/CD8比例的测定结果显示,3个浓度组和对照组相比均有显著性差异,P<0.05,说明尼古丁影响T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的分化,使CD4/CD8比例降低,而且,高浓度尼古丁的作用更加显著。(2)经不同浓度尼古丁处理后,血浆中五种细胞因子的含量发生明显改变:IL-2和TNF-α浓度增加,IL-4和IL-5浓度降低。IFN-γ没有检测到。(3)RT-PCR结果显示,经不同浓度尼古丁处理后,T细胞内五种细胞因子的基因表达均受到不同程度的影响,IL-4、IL-5和TNF-α的基因表达下降,IL-2和IFN-γ基因表达增高。结论:小鼠经尼古丁处理后,CD4+细胞与CD8+细胞的比值下降,Th2细胞因子(IL-4、IL-5)的表达下降,Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)表达有增高趋势。因此,尼古丁可能影响T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的分化,使CD4/CD8比例降低;可能影响Th1,Th2细胞的平衡,主要是抑制Th2细胞,进而抑制体液免疫应答。