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研究目的华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)又称肝吸虫,成虫寄生于肝胆管内,可引起华支睾吸虫病(clonorchiasis),又称肝吸虫病.主要流行于东南亚地区,全世界估计有2800万病人.中国有华支睾吸虫感染者近2000万,广东省为主要的高发区,估计感染者约500万人.该实验从华支睾吸虫成虫cDNA文库中克隆出一个新基因--溶血磷脂酶基因(lysophospholipase,lysoPLA),溶血磷脂酶是一种作用于生物膜上作为调节控制多功能溶血磷脂酸的酶,其作用主要是水解溶血磷脂酸,在宿主患病时能提高溶血磷脂酸的表达水平<[2]>.而溶血磷脂酸在磷脂的新陈代谢中发挥着类除垢剂的作用,其在生理学上和病理学上发挥着重要的作用[1^4].该研究希望通过克隆表达溶血磷脂酶基因,并对其功能进行初步的研究,为研究华支睾吸虫疫苗提供理论和实验依据.研究内容包括lysoPLA基因的克隆表达、蛋白免疫大白鼠后的免疫反应.方法①华支睾吸虫lysoPLA基因的体外扩增、克隆通过华支睾吸虫成虫cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因,以cDNA文库为模板进行PCR扩增出lysoPLA基因的编码区序列,1.0％的琼脂糖凝胶电泳鉴定.PCR产物、质粒pGEX-4T-1分别酶切、回收,后进行连接、转化、初筛、PCR与酶切鉴定.②华支睾吸虫lysoPLA基因的原核表达和纯化利用IPTG诱导大肠杆菌表达出lysoPLA基因,经SDS-PAGE电泳鉴定表达产物,表达产物大小与预测结果相符,证实lysoPLA基因可以在原核生物E. coli Bl-21中进行表达.③lysoPLA纯化蛋白免疫大白鼠所诱导的免疫应答利用纯化的蛋白,结合福氏佐剂对SD大白鼠进行蛋白免疫,在大鼠的腹部和大腿内侧的皮内进行多点注射免疫.结论成功构建了含lysoPLA基因的原核表达重组质粒,并诱导表达出华支睾吸虫的lysoPLA融合蛋白,在动物免疫中得到阳性结果,证明融合蛋白有抗原-抗体免疫反应性.有关溶血磷脂酶在华支睾吸虫中的作用以及其在预防、治疗华支睾吸虫病的意义有待进一步的研究.