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第一部分：EX-ACEA-0010MA对急性髓细胞白血病(AML)细胞株的作用。目的：探索EX-ACEA-0010MA对AML细胞株的生长抑制、周期阻滞、诱导凋亡以及抑制集落形成的作用,为下一步研究作用机制打下基础。方法：应用MTT法检测EX-ACEA-0010MA对AML细胞株和人正常的肝细胞株L02细胞的生长抑制作用,并与已有的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂Ibrutinib进行比较；集落培养法、Annexin V/PI双染法和流式细胞术检测EX-ACEA-0010MA作用AML细胞株细胞后细胞的集落形成能力、细胞凋亡和细胞周期情况；Hoechst33258染色法观察EX-ACEA-0010MA诱导细胞凋亡的形态学变化。结果：(1)不同浓度的EX-ACEA-0010MA作用于AML细胞株U937、KG-1以及正常肝细胞L02后,前两者24h的半数致死率(IC50)分别为1.05μM和6.48μM；48h的IC50值分别为0.34μM和4.78μM,而对L02细胞株无明显杀伤作用。说明该药物对正常细胞毒副作用较小。不同浓度的Ibrutinib作用于AML细胞株U937、KG-1和L02细胞后,前两者24h的IC50分别为19.46μM和44.97gM；48h的IC50值分别为8.08μM和9.30μM。(2)将1.25μM的EX-ACEA-0010MA和20μM的Ibrutinib分别作用于L02细胞24h后发现EX-ACEA-0010MA对正常肝脏细胞L02的毒性作用明显比Ibrutinib低(p<0.001)。(3)EX-ACEA-0010MA作用于U937和KG-1后,随着药物浓度的增加,抑制其集落形成的现象更加明显。(4)EX-ACEA-0010MA对U937和KG-1均有诱导凋亡的作用。(5)EX-ACEA-0010MA对U937有明显的周期阻滞,1.25μM药物作用24h后能明显阻滞G0/G1期。但在药物对KG-1的IC50浓度时,其对KG-1周期阻滞作用不明显。(6)分别以1.25μM和10μM的EX-ACEA-001OMA作用于U937和KG-1细胞株24h后,经Hoechst33258染色法染色后,可发现与对照组相比细胞核内出现明显的凋亡小体,进而从形态学上证明了EX-ACEA-0010MA可以诱导AML细胞发生凋亡。结论：(1) EX-ACEA-0010MA对AML细胞株的增殖抑制作用比Ibrutinib的作用强,并且对正常对照细胞L02无明显杀伤作用,比Ibrutinib更具有安全性。(2)EX-ACEA-0010MA具有显著地抑制集落形成能力和促进细胞凋亡能力,并且对U937细胞株有明显的周期阻滞能力。第二部分：EX-ACEA-0010MA抗急性髓细胞白血病的作用机制目的：探索EX-ACEA-1101MA对AML细胞株的作用机制方法：应用Western Blot法检测EX-ACEA-0010MA作用U937、KG-1细胞株细胞后检测BTK、p-BTK、PI3K/AKT通路蛋白,Caspase家族蛋白和BCL2家族蛋白的表达变化以及G1/S期检测点周期依赖性激酶CDK4和CDK6；免疫荧光检测EX-ACEA-0010MA作用U937、KG-1细胞株细胞后p-NF-κB(p-P65)的表达。结果：(1) Western Blot检测显示EX-ACEA-0010MA作用后U937和KG-1细胞中p-BTK蛋白的含量明显降低而总的BTK蛋白没有明显改变。(2)PI3K/AKT通路中关键蛋白PI3K(p110)和p-AKT以及下游的p-IKK均随着药物浓度的增高而降低。(3) Caspase3、Caspase8和PARP均有明显激活,而Caspase9没有明显激活且BCL2家族蛋白均没有明显变化。GO/G1期检测点蛋白CDK2、CDK4和CDK6的表达均有下降。(4)用10μM的EX-ACEA-0010MA作用U937、KG-1细胞株细胞后经免疫荧光法镜下观察发现p-P65的表达及入核较对照组减少。结论：(1) EX-ACEA-0010MA通过抑制PI3K/AKT通路,从而抑制下游p-P65的表达,阻止其入核发挥转录因子作用而实现其促进细胞凋亡的作用。(2)EX-ACEA-0010MA可通过抑制周期蛋白依赖性激酶CKD2、CDK4和CDK6的表达,阻止白血病细胞进入S期,从而阻止白血病细胞DNA的复制。(3)EX-ACEA-0010MA诱导AML细胞株凋亡的作用部分依赖于Caspase的激活,且主要是通过外源性途径。