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子宫内膜异位症（endometriosis, EMs）是一种复杂的妇科疾病，受遗传、环境、免疫等相关因素影响，但至今病因未明，寻找致病基因是目前的研究热点。全外显子测序技术（Whole exome sequence, WES）是一种经济、有效的高通量测序技术，对鉴定复杂疾病的致病基因有突破性发现。目前，国内外尚无应用WES研究EMs的相关报道。本实验拟采用WES技术对在位、异位内膜腺体细胞进行分析，尝试寻找相关基因改变，期望可以在基因层面上验证病因假说，有助于明确EMs的发生机制。实验共分为两个部分。一、激光捕获显微切割技术应用于子宫内膜异位症DNA提取及全基因组扩增的方法学研究目的：探索一套利用激光捕获显微切割技术（Laser capture microdissection,LCM）分离EMs腺体细胞提取微量DNA及全基因组扩增（Whole genomeamplification, WGA）的操作流程。方法：利用LCM分别对10例石蜡标本及10例冰冻标本进行腺体细胞捕获，收集足量腺体细胞后提取微量DNA，并对微量产物进行浓度、吸光度检测，经多聚酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR）扩增进行验证。另利用LCM对5例石蜡标本及5例冰冻标本进行捕获，获取细胞后行WGA，检测产物浓度、吸光度。选取8个常见的人体管家基因片段进行PCR以验证产物完整性，并对两组结果进行对比分析。结果：冰冻与石蜡标本在LCM获取腺体细胞及提取微量DNA的环节中均可获得满意效果。但经WGA后，石蜡标本无法保留完整的基因组信息。结论：采用LCM对EMs冰冻切片进行腺体细胞捕获并提取微量DNA及WGA是一种操作简便，结果稳定、可靠的方法，可作为日后EMs基因组研究常规技术路线之一。二、全外显子测序技术探寻卵巢子宫内膜异位症致病基因的研究目的：采用WES技术对EMs在位、异位内膜腺体细胞DNA及外周血DNA进行分析，寻找相关致病基因。方法：将7例LCM切割后在位、异位腺体细胞进行WGA，并提取该7例患者例外周血DNA作为背景。合格标本使用IlluminaHiseq2000测序平台进行测序，得出原始数据，采用肿瘤分析流程进行比对、过滤后对clean data进行生物学信息分析。结果： MUC16、MGA、AHNAK、CENPE、HERC1、MAGEC1及PCLO7个基因可能参与卵巢内异症的发病，但确切结论需要后续大样本量验证。结论：1.卵巢子宫内膜异位症在位内膜组织及异位内膜组织腺体细胞基因改变明显高于一般疾病，这可能是子宫内膜的固有特性。2.卵巢子宫内膜异位症体细胞SNVs突变呈随机化表现，不存在类似肿瘤细胞的热点突变。3.我们检测出的致病基因参与细胞侵袭、黏附的过程，从侧面支持了在位内膜决定论。