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硫化叶菌属于古菌域中的泉古菌界,其最适生长温度约为80℃,最适生长pH约为3。硫化叶菌是研究古菌遗传机制的模式生物。作为古菌滑夹装载因子,硫化叶菌复制因子C(RFC)能够将滑夹PCNA装载至DNA模板上。此外,硫化叶菌RFC还能与引发酶发生相互作用,调节引发酶的活性。 本论文对硫化叶菌RFC与DNA聚合酶B1(PolB1)的相互作用进行了系统研究。我们采用Pull down、Blue Native聚丙烯酰胺凝胶电泳(BN-PAGE)和生物膜干涉技术(BLI)等方法,证明硫化叶菌RFC复合物与PolB1之间存在物理相互作用,测定了二者之间的亲和力(KD=~0.4μM)。实验显示,RFC以不依赖于ATP的方式促进PolB1的聚合和外切活性,而且含翻译后修饰的天然RFC复合物对PolB1活性的激活作用强于不含修饰的重组RFC蛋白。另外,RFC促进PolB1活性的能力与其DNA结合能力无关。进一步的研究表明,RFC可能通过增强PolB1与DNA的结合,促进PolB1的活性。根据上述结果以及先前关于RFC与引发酶相互作用的研究,我们推测在引物合成与传递过程中,RFC能够调控引发酶活性,结合PolB1,并在装载PCNA后,适时帮助将引物传递给PolB1,启动高效DNA复制。