人脑AChE的基因表达和体外翻译

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sxhh122
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人脑AChE的基因是soreqH于1990年最先克隆分离的.此后FischerM,VelanB和KronmanC等分别进行发人脑AChE的原核 细胞和真核细胞的表达.但原核细胞表达的人脑AChE以包涵体形式存在,产率低,且复性困难.因此我们重新构建重组人脑AChE原核融合蛋白表达载体PinPointXII-AChE进行原核细胞表达,以期能提高原核表达水平.真核细胞表达的rhAChE的生化性质与天然人脑AChE十分相似.研究人员首次用pcDNA-AChE在体外转录及兔网织红细胞体外翻译偶联系统中表达人脑AChE,在转录和翻译过程中按不同时间间隔取样,进行酶活性和放射自显影分析,观察新生肽链的长度变化.研究人员改进的DTNB测定AChE活性的方法适用于血红蛋白含量高的样品,大大改善了对血液样品的中AChE的检测结果;研究人员将电鳐AChE与羊抗小鼠IgG连续作为标记二抗用于ELISA实验,检测灵敏度较同样条件下的HRP酶标二抗至少高一个数量级;研究人员还制备了14株(9株IgM抗体,5株IgG抗体)抗AChE的单元隆抗体,并对人脑AChE十肽肽库进行了筛选,发现了一个新的抗原表位,即单抗F9识别的第111号位点.
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