【摘 要】
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目的 PTEN和P27均对细胞增殖起负性调控作用,它们的表达异常与肿瘤的生物学行为密切相关。本实验在检测原发性星形细胞肿瘤中PTEN和P27表达情况的同时,对这两个抑癌基因的
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目的 PTEN和P27均对细胞增殖起负性调控作用,它们的表达异常与肿瘤的生物学行为密切相关。本实验在检测原发性星形细胞肿瘤中PTEN和P27表达情况的同时,对这两个抑癌基因的表达程度与肿瘤病理分级之间的关系进行了评估。 方法 一、标本来源 46例原发性星形细胞肿瘤标本和10例非肿瘤脑组织标本均为中国医科大学附属第二医院神经外科2002年3月-2004年3月手术切除标本,所有肿瘤均按照WHO2000年制定的神经系统肿瘤分类标准重新确定病理诊断和分级,其中包括WHO Ⅰ级11例,Ⅱ级13例,Ⅲ级12例,Ⅳ级10例。 二、免疫组化染色方法 全部56例标本经甲醛固定和石蜡包埋后,进行免疫组化染色,检测PTEN和P27表达。具体步骤如下:首先将石蜡标本制成5微米厚切片,常规二甲苯脱蜡酒精至水后,浸入3%H2O2溶液中,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。切片浸入0.01M枸橼酸溶液（PH=6.0）中,用500W微波炉加热进行微波抗原修复15分钟。切片滴加正常二抗动物血清封闭,室温下孵育30分钟,消除非特异性反应。切片分别滴加抗PTEN和P27单克隆抗体,在4℃恒温箱中孵育过夜,然后滴加生物素标记的二抗,室温下孵育90分钟。应用超敏SP试剂盒,按照S-P法常规显色。最后用苏木素复染切片。 凡细胞浆内出现明显棕黄色颗粒者定义为PTEN阳性细胞,细胞核内出现明显棕黄色颗粒者定义为P27阳性细胞。随机取5个高倍视野,计数1000个细胞,计算阳性细胞百分率。 三、统计学分析方法 应用X2检验,对非肿瘤脑组织和各级别星形细胞肿瘤之间PTEN和
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