论文部分内容阅读
研究背景:主动脉瓣膜钙化的病理过程包括内质网应激,瓣膜间质细胞(VICs)向成骨样细胞分化,炎症和凋亡,但其机制尚不清楚。HDAC6是HDACⅡb亚族中的一员,在乳腺癌细胞中抑制HDAC6可触发内质网应激。我们首先发现在钙化性主动脉瓣膜疾病患者的主动脉瓣膜组织中,HDAC6表达显著降低。研究已证实内质网应激参与主动脉瓣膜钙化的进展。因此,该论文旨在阐明HDAC6在主动脉瓣膜钙化中的作用和机制。方法及结果:体外应用钙化培养基诱导培养人主动脉瓣膜间质细胞(hVICs),建立主动脉瓣膜钙化的细胞模型。特异性的HDAC6抑制剂Tubacin(10μM)处理hVICs48h,结果显示hVICs的Runx2表达增加。这一结果被HDAC6沉默技术进一步证实,即在hVICs中敲低HDAC6显著增加Runx2的表达。同时我们检测到Tubacin处理hVICs48h后,内质网应激标志蛋白(p-IRE1α、p-PERK、p-eif2α、ATF4)表达增加。应用siRNA技术敲低hVICs的HDAC6后,表现出与Tubacin处理同样的结果,即HDAC6沉默后显著激活内质网应激。牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)在体内和体外被证实是一种经典的内质网应激抑制剂。TUDCA预处理(100 μM)可以显著抑制Tubacin处理或HDAC6沉默诱导的内质网应激信号通路的激活,同时抑制Runx2的表达。ATF4是内质网应激信号通路中重要的成员。敲低ATF4也显著抑制Tubacin处理或HDAC6沉默诱导的Runx2的表达。最后,hVICs分别被转染慢病毒HDAC6 shRNA或者对照组scr shRNA,转染后的hVICs给予TUDCA处理,以无TUDCA处理组为对照组,用钙化诱导培养基培养14天,每3天更换培养基。茜素红染色结果显示,HDAC6敲低使钙结节形成增加,而TUDCA抑制内质网应激后钙结节形成减少。结论:HDAC6降低通过激活内质网应激介导的成骨通路促进主动脉瓣膜钙化。HDAC6对主动脉瓣膜钙化有保护作用,为预防和治疗主动脉瓣膜钙化的提供了可能的新靶点。