研究背景和目的:梗阻性黄疸主要由胰胆管疾病引起,如不及时处理,会引起持续性胆汁淤积,患者血清胆红素和胆汁酸水平升高,诱发肝细胞内炎症反应,肝内纤维结缔组织出现异常增生,进而形成肝纤维化乃至肝硬化。近年来,国内外关于Wnt信号通路与肝脏疾病的研究成为热点,大量的研究结果证实,Wnt/β-catenin信号通路的非正常激活,参与了肝脏炎症、肝硬化、肝纤维化及肝脏良恶性肿瘤等疾病的发生发展过程。miRNA-122作为在肝脏中高度表达的重要microRNA已被证明是一种有效的肝病生物标志物,可以靶向调控Wnt1基因的表达。水飞蓟宾是一种保肝护肝药物,具有调节脂质代谢、抗氧化、清除自由基、稳定细胞膜的作用,但其在黄疸致肝纤维化的损伤修复过程中的具体机制仍值得深入的探讨。本实验基于上述结论,观察水飞蓟宾对梗阻性黄疸小鼠肝组织纤维化的影响以及miRNA-122介导的经典Wnt信号通路中Wnt1、β-catenin、GSK-3β在肝组织中的表达差异,探讨水飞蓟宾对梗阻性黄疸致肝纤维化的作用机制。方法:30只雄性KM小鼠随机分为模型组(M)、水飞蓟宾组(SFJB)、假手术组(SO),每组10只。除假手术组外,其余各组均采用胆总管悬挂法制作梗阻性黄疸模型,48小时后解除梗阻,SFJB组用20mg/ml的水飞蓟宾溶液以0.2mg/g/d的剂量进行灌胃,其余两组小鼠予以等容量体积生理盐水灌胃。7周干预治疗后,以摘除眼球方式取血并分离肝脏组织。采用分光光度法对各组小鼠谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)及碱性磷酸酶(ALP)在血清中的含量进行检测;HE染色观察肝组织病理改变;免疫组织化学染色法检测肝组织Wnt1、β-catenin、GSK-3β的差异表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肝组织中Wnt1、β-catenin、GSK-3β蛋白含量;Realtime-PCR检测肝组织中Wnt1、β-catenin、GSK-3β、p-GSK3β、miRNA-122含量。结果:(1)手术48小时后,模型组、水飞蓟宾组小鼠食欲变差,毛发、鼠尾及耳尖重度黄染,尿液颜色深黄;假手术组小鼠饮食正常,毛发、鼠尾及耳尖无黄染,尿液呈淡黄色。(2)与模型组相比,水飞蓟宾组小鼠血清中AST、ALT、TBIL、TBA及ALP含量降低(P<0.01)。(3)HE染色结果显示,假手术组肝细胞呈放射状排列,肝索、肝窦结构清晰;模型组可见小鼠肝细胞间隔增宽,排列紊乱,肝索断裂,肝细胞出现核固缩,组织间隙见炎性细胞浸润和红细胞堆积,并可见许多梭状的肌成纤维细胞;水飞蓟宾组可见肝小叶结构欠规则,肝索排列欠整齐,梭状肌成纤维细胞较模型组减少,肝小叶结构变化较模型组有明显改善。(4)免疫组化结果显示,Wnt1、β-catenin、GSK-3β在假手术组中表达最低,阳性染色少,分布范围较分散;在模型组中表达最高,阳性染色多,分布范围较广泛;与模型组相比,水飞蓟宾组各因子表达水平显著下降,阳性染色面积显著下降(P<0.01)。(5)ELISA检测结果显示,Wnt1、β-catenin、GSK-3β蛋白含量在假手术组中最低,模型组中最高,与模型组比较,水飞蓟宾组Wnt1、β-catenin、GSK-3β蛋白含量显著降低(P<0.01)。(6)Realtime-PCR检测结果显示,与假手术组相比,模型组肝组织中Wnt1、β-catenin、GSK-3βmRNA含量明显增高(P<0.01),且水飞蓟宾组低于模型组(P<0.01);miR-122 mRNA含量在假手术组中最低,与假手术组相比,模型组miR-122 mRNA含量明显升高(P<0.01),且水飞蓟宾组高于模型组(P<0.01)。结论:水飞蓟宾具有改善梗阻性黄疸小鼠肝纤维化的作用,其机制可能与水飞蓟宾通过上调miRNA-122的表达,降低Wnt/β-catenin通路中Wnt1、β-catenin、GSK-3β的表达有关。