复合雪旺细胞组织工程材料促进三叉神经髓鞘修复的实验研究

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原发性三叉神经痛是一种常见的颅神经综合症。微血管减压术是外科治疗三叉神经痛的首选,其核心技术是将血管从神经压迫部位分离,然后用Teflon垫开。但是,Teflon仅仅起到物理隔离的作用,对髓鞘的修复并无作用。而且在复发三叉神经痛再次手术中发现,Teflon与神经、血管存在粘连,甚至有肉芽肿形成。研究证实,复合雪旺细胞的组织工程材料具有促进周围神经轴突再生和髓鞘形成的作用。组织工程材料是否具有促进三叉神经髓鞘修复的作用,如有作用其可能的机制是什么,这些正是本研究希望解决的问题。实验目的:制备复合雪旺细胞的组织工程材料,植入脱髓鞘三叉神经周围,明确组织工程材料促进三叉神经髓鞘修复的作用及机制,为三叉神经微血管减压术植入材料的选择提供新思路,进一步提高三叉神经痛的手术疗效。实验方法:利用三叉神经颅内段定量损伤制备大白兔三叉神经痛动物模型,通过行为学、电生理学及病理学鉴定动物模型。运用坐骨神经体外预变性培养及纯化雪旺细胞,镜下观察、免疫荧光鉴定雪旺细胞数量及纯度。制备复合雪旺细胞的Teflon、胶原/壳聚糖组织工程材料,观察雪旺细胞在材料中的存活及增殖情况。制备三叉神经痛动物模型,将复合雪旺细胞的组织工程材料植入脱髓鞘的三叉神经周围,检测材料植入后雪旺细胞的存活率。观察三叉神经髓鞘修复情况,明确复合雪旺细胞的组织工程材料促进髓鞘修复的作用。RT-PCR、Western blot检测GDNF、BDNF转录和表达情况,揭示髓鞘修复的机制。实验结果:通过三叉神经颅内段定量损伤成功制备了三叉神经痛动物模型,三叉神经有脱髓鞘改变,模型稳定、重复性好。利用坐骨神经体外预变性可获得大量高纯度的雪旺细胞。实验成功制备了复合雪旺细胞的Teflon、胶原/壳聚糖组织工程材料,雪旺细胞在材料上生长良好。将复合雪旺细胞的组织工程材料植入动物模型的三叉神经周围,术后7天、14天雪旺细胞存活良好。组织工程材料组大白兔三叉神经功能显著改善,三叉神经髓鞘修复较好。RT-PCR、Western blot结果显示GDNF、BDNF转录和表达水平较其它组显著增高。实验结论:复合雪旺细胞的Teflon、胶原/壳聚糖组织工程材料植入大白兔三叉神经周围,雪旺细胞存活良好,且具有促进髓鞘修复的作用,其作用机制可能与分泌的GDNF、BDNF有关。
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