【摘 要】
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表皮生长因子受体（EGFR）是ErbB受体家族中的一种跨膜酪氨酸激酶受体,在人体组织正常的情况下仅表达在上皮细胞表面。大多数的胶质母细胞瘤（GBM）显著表达EGFR。当EGFR活化后,下游的信号通路与蛋白激酶才会相继活化,开始对相关基因的调控,调节着肿瘤细胞的增殖和死亡。表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）是GBM中最为常见的EGFR突变。研究发现正常细胞中不表达EGFRvⅢ,EGFRvⅢ仅
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表皮生长因子受体（EGFR）是ErbB受体家族中的一种跨膜酪氨酸激酶受体,在人体组织正常的情况下仅表达在上皮细胞表面。大多数的胶质母细胞瘤（GBM）显著表达EGFR。当EGFR活化后,下游的信号通路与蛋白激酶才会相继活化,开始对相关基因的调控,调节着肿瘤细胞的增殖和死亡。表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）是GBM中最为常见的EGFR突变。研究发现正常细胞中不表达EGFRvⅢ,EGFRvⅢ仅表达于癌细胞中,这一发现使其成为癌症治疗的理想生物标志物。随着对EGFRvⅢ和其信号通道研究的不断深入,逐渐确认恶性肿瘤组织中EGFRvⅢ的异常表现与恶性程度和信号通路有直接联系。单域抗体（Single domain antibody,sd Ab）,分子量约12-15 kDa。是一种特殊的二聚体抗体。与传统的单克隆抗体（150 kDa）相比,sdAb具有体积小、亲和力高、易表达、渗透性好、稳定性高（热、pH和离液介质）、生产成本低等特点。基于此,我们通过免疫健康双峰驼并测定EGFRvⅢ胞外区蛋白的抗体效价,采取血液分离淋巴细胞、反转录成cDNA,扩增VHH基因与pMECS载体连接,成功建立EGFRvⅢ胞外区蛋白单域抗体库。使用EGFRvⅢ胞外区蛋白作为筛选抗原对单域抗体噬菌体抗体库进行筛选,选取了Phage ELISA鉴定结果中对EGFRvⅢ胞外区蛋白相对结合能力较强的一株克隆,通过质粒重组,将单域抗体基因片段与表达载体pET-22b载体连接,并转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,进行诱导表达和纯化,从而得到高结合活性的EGFRvⅢ胞外区蛋白特异性单域抗体。本试验制备的针对EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体为利用EGFRvⅢ为靶点的GBM诊断和治疗提供了一种新的选择。
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