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大肠癌(colorectal cancer, CRC)是消化道常见的恶性肿瘤。近年来,由于饮食结构、生活方式的不断改变,CRC的发生率不断提高,在经济发达地区发生率的升高更明显。目前普遍认为CRC是多因素作用、多基因参与、多阶段发展的疾病。近年来分子生物学的长足进展,使得CRC治疗的研究方向朝着更新更微观发展,对其各种分子机制、细胞周期调控、凋亡分化诱导的研究越来越深入。目前研究发现,ARD1与乳腺癌、甲状腺癌和肺癌相关。近期研究发现在乳腺癌中hARD1的cDNA序列含有一个AAGCCGGACC的Tag序列,经过tamoxifen处理后表达强度明显降低。在对肺癌细胞系H1299和A549研究发现中,用RNAi (RNA interference, RNAi)技术沉默hARD1后,发现细胞增殖被抑制,停留在G1期；hARD1敲除后,cyclinD1基因的启动子被抑制,同时与cyclin D1相关的beta-catenin/TCF4转录活性被抑制。Cyclin D1作为已经被证实的一个癌基因,在细胞增殖的G1/S期起到限速作用。而cyclin D1在肺癌中被抑制的现象是否也存在于大肠癌中,值得进行相关的研究,也为大肠癌中ARD1的研究提出了新的参考通过反义核酸转录后进行的基因沉默,被广泛的运用在基因功能研究,基因表达调控机制等各种领域,RNAi为基因治疗奠定了坚实的基础。同时,近年来由于对ARD1研究的越来越深入,对其在维持细胞分化,增殖,稳定性等诸多重要性的发现,促使对其分子生物学机制的探索变得热门起来。因此,通过RNAi进行对ARD1的研究会成为一项有意义的实验。本实验通过筛选有效沉默ARD1的siRNA转染大肠癌细胞株,通过流式细胞技术分析ARD1沉默后细胞周期的改变情况,研究对于大肠癌细胞株,ARD1对于细胞周期的影响。目的：根据ARD1的基因序列,筛选出有效沉默的siRNA。以三株大肠腺癌细胞株SW620、LS-174T和HCT-8为对象,研究ARD1被沉默后大肠腺癌细胞周期的变化。方法：1.SW620、LS-174T和HCT-8细胞准备。2.将7条siRNA转染上述三株细胞。3.使用高内涵筛选仪对转染对照组进行检测分析。4. Trizol法提取RNA,测量细胞总RNA。5.按Promega逆转录试剂盒操作生成cDNA。6.根据TaKaRa公司SYBR(?)RT-PCR Kit (Perfect Real Time)定量PCR试剂盒的操作指南进行定量PCR反应。筛选有效沉默率siRNA条带。7.有效siRNA转染三株大肠癌细胞。8.流式细胞仪检测细胞周期。结果1. siRNA转染效果良好,都在70%以上2.对siRNA的沉默效果分析,筛选出4条有效沉默率的siRNA,目标序列分别是CAGAGGACCTAATGAACAT, GGTGGAGAGCAAAGGCAAT, CCATGATAGAGAACTTCAA, GAGCTTTCACAATAAATTT.其沉默率分别是76.6%、79.7%、74.3%和75.8%。3.运用AACT进行相对定量分析,分别以(3-actin和GAPDH为内参进行siRNA有效性分析,两者的数据分析结果基本一致。4.转染后,流式细胞计数G0/G1期的DNA含量。SW620细胞株24h、48h和72h的DNA含量均值为52.91、50.93和17.81；LS-174T细胞株24h、48和72h的DNA含量均值是55.92、55.3和20.35；HCT-8细胞株4h、48和72h的DNA含量均值是39.57、40.22和44.17。5.转染后,流式细胞计数G2/M期的DNA含量。SW620细胞株24h、48h和72h的DNA含量均值为1.24、5.42和23.82；LS-174T细胞株24h、48和72h的DNA含量均值是5.63、1.19和42.7；HCT-8细胞株4h、48和72h的DNA含量均值是4.22、15.64和19.55。6. G0/G1期对照组和转染组,各时段三株细胞的DNA含量均降低；G2/M期,各时段三株细胞DNA含量均升高,有统计学差异。结论：ARD1转染后,三株大肠癌细胞的G0/G1期降低,G2/M期升高,细胞周期停留在G0/G1期。