【摘 要】
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目的:在HIV/AIDS患者体内,巨噬细胞是HIV的“储存库”,但同时也是抗病毒天然免疫应答中重要的抗原提呈细胞。有研究报道,某些microRNAs能够参与调控巨噬细胞抗病毒天然免疫过程。本研究通过建立HIV感染巨噬细胞的体外细胞模型,探究miR-146a在巨噬细胞抗HIV感染天然免疫应答中的调控作用,并阐明其调控机制。方法:首先分离培养巨噬细胞,质粒转染获得HIV病毒,建立HIV感染巨噬细胞模型
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目的:在HIV/AIDS患者体内,巨噬细胞是HIV的“储存库”,但同时也是抗病毒天然免疫应答中重要的抗原提呈细胞。有研究报道,某些microRNAs能够参与调控巨噬细胞抗病毒天然免疫过程。本研究通过建立HIV感染巨噬细胞的体外细胞模型,探究miR-146a在巨噬细胞抗HIV感染天然免疫应答中的调控作用,并阐明其调控机制。方法:首先分离培养巨噬细胞,质粒转染获得HIV病毒,建立HIV感染巨噬细胞模型,通过q-PCR的方法验证感染成功。HIV感染巨噬细胞后,收集细胞,利用Trizol提取细胞总RNA,通过q-PCR的方法筛选出表达量变化最大的miR-146a。人工合成miR-146a的mimics(模拟物)和inhibitor(抑制物),通过转染的方法分别转染进巨噬细胞,使巨噬细胞过表达miR-146a或抑制miR-146a表达,再通过q-PCR和ELISA的方法检测miR-146a对HIV感染巨噬细胞的调控作用及对天然免疫的影响。通过q-PCR和Western blot方法探究miR-146a在HIV感染巨噬细胞过程中的调控机制。结果:在成功建立HIV感染人原代巨噬细胞的体外细胞模型后,通过q-PCR的方法发现巨噬细胞感染HIV后miR-146a的表达量显著增加。通过向巨噬细胞中转染miR-146a的mimics/inhibitor,构建巨噬细胞过表达/抑制miR-146a后,通过q-PCR的方法发现miR-146a可以促进HIV感染巨噬细胞。在过表达miR-146a组中,通过q-PCR和ELISA的方法证实HIV感染巨噬细胞后miR-146a降低巨噬细胞IFN-α的分泌,并且ISGs的表达量也下调,在抑制miR-146a组中,趋势正好相反。通过q-PCR和Western blot方法证实,在HIV感染巨噬细胞后miR-146a促进SOCS-1蛋白的表达。结论:HIV感染巨噬细胞后,miR-146a表达量上升,miR-146a通过上调SOCS-1蛋白的表达,抑制巨噬细胞IFN-α的分泌及ISGs的表达,最终促进HIV感染巨噬细胞。
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