本课题研究的CyPA(cyclophilin 18，cyclophilin A，CyPA)是亲免蛋白家族的成员。亲免蛋白具有两大主要特征：一是遗传上的保守性，即从低等生物、植物、动物直至人等高级哺乳动物的体内均有亲免蛋白存在；二是均具有肽脯氨酰顺反异构酶活性，这种活性能被与之结合的用于器官移植的免疫抑制剂环孢菌素A所抑制。此外，CyPA也扮演分子伴侣的角色，帮助蛋白质折叠，并参与蛋白质与其配体的组装/分解。CyP与CsA结合抑制了钙离子、钙调素(Calmodulin，CaM)依赖的神经钙蛋白(Calcineurin，CN)的磷酸酶活性，阻断IL-2等T细胞增殖必需的一些细胞因子的转录，介导CsA免疫抑制作用。CyP在自身免疫性疾病和器官移植排斥研究中具有很高的应用价值。 本文从猪肝细胞中提取总RNA，通过RT-PCR克隆出猪肝细胞亲环素A(pCyP 18)，测定其核苷酸序列并转入大肠杆菌中进行高效表达。pCyPA核苷酸序列含有478个碱基，编码159个氨基酸，分子量为18kD。重组质粒转入大肠杆菌中，30℃诱导表达融合蛋白GST-pCyPA，经Sepharose 4B亲合层析珠吸附后，用Factor-Xa进行酶切，得到纯化的pCyPA。所得pCyPA经阳离子交换柱纯化后，再经硫酸铵沉淀法浓缩，所得的蛋白质溶液可用于蛋白质晶体学实验，然后利用气相扩散悬滴法和Crystal Screen Kit试剂，将pCyPA蛋白质溶液在不同的结晶缓冲液中进行结晶。我们试图得到pCyPA的晶体，利用X光衍射技术分析它们的结构，并且与天然pCyPA的晶体结构进行比较，从而揭示天然的和克隆的pCyPA在结构和功能上的差异。