肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症之一,发病率和死亡率增长最快,严重危害人类健康。肺癌主要分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌约占85%。近几十年来,治疗非小细胞肺癌药物从开始的杀伤型细胞毒药物到后来的针对靶点、低毒、有选择性药物,但仍存在耐药性和不敏感性等问题亟需克服。在众多的化学类抗肿瘤药物中绝大多数都是以天然抗肿瘤活性成分为先导化合物,再加以修饰、改造以达到药用目的。从天然产物中提取的小分子化合物是新药的主要来源。前期研究发现天然化合物D261能够杀伤细胞,但D261对NSCLC是否具有杀伤作用还不清楚。基于此,我们对D261是否对NSCLC的作用进行了进一步探索。1、D261对非小细胞肺癌细胞生长的影响本研究采用CCK-8法检测D261（0.3125-20uM）对多种肿瘤细胞A549、NCI-H460、MCF7、HepG2和KGN活力的影响；用CFSE染色法检测D261（0.5、2和8uM）细胞增殖能力；用细胞克隆实验检测D261对细胞克隆形成的影响。实验结果显示,D261能够有效抑制非小细胞肺癌细胞A549、NCI-H460的细胞活力,并且呈现剂量依赖性。D261能够有效抑制两种非小细胞肺癌细胞的增殖,并且高剂量的抑制效果明显。细胞克隆实验显示：D261能够有效抑制细胞长期的生长,8uM剂量处理的A549、NCI-H460细胞组无论是处理1、2天还是7天都没有克隆；作用1、2天的2uM处理组细胞克隆数目比对照组明显减少,7天处理组则几乎没有细胞克隆。综上,D261能够有效抑制体外非小细胞肺癌细胞的生长。2、D261抑制细胞生长的机制抑制细胞生长主要从促进细胞凋亡和抑制细胞周期两个方面起作用，我们首先从这两个方面来研究D261对细胞的抑制作用。细胞周期调控异常导致无限增殖是促进肿瘤发生发展的重要因素。因此，也有人认为，肿瘤是一类细胞周期性疾病。细胞周期主要由细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖激酶（TOK）以及CDK抑制蛋白（CKIs）来调控。CDK正调控，CDKI负调控，两者协调控制细胞周期。有研究表明PI3K/Akt信号通路的过度激活在NSCLC中很常见，并且调控细胞周期，影响细胞增殖。Akt通过对cyclin D1激酶糖原合成酶-30（glucose syntasekinase-33, GSK3P）的调节起到防止cyclin D1下调的作用。此外，Akt还能抑制CKIs p27KIPl和p21CIPl/WAFl的表达并通过磷酸化的形式直接或间接调节p27和p21的激活。约有50%-70%的NSCLC中存在Akt的磷酸化，目前己陆续幵发出了一系列以该通路为靶标的特异性药物。我们用Annexin V-FITC/PI双染细胞通过流式细胞术检测细胞凋亡，用PI单染检测细胞周期。结果显示D261处理A549和NCI-H460后，凋亡比率与对照组相比没有显著增加,然而细胞周期被阻滞在G1期。cyclin Dl、cyclin El、CDK2及CDK4这4个蛋白是细胞周期G1期到S期节点转变的重要枢纽。接着我们用western blot方法检测了这4个蛋白表达水平。结果显示cyclin Dl和CDK2/4能够随着处理浓度的增加，表达下降，而使细胞阻滞在G1期。同时我们用westernblot分析了pAKT/AKT的表达情况，结果显示憐酸化AKT表达下降，并且p21表达上升。3、D261抑制体内肿瘤细胞的生长为了评价D261在体内抑制肿瘤的效果，我们建立了裸鼠移植瘤模型。将4*10^-6个NCI-H460细胞右侧腋下皮下接种裸鼠。实验分为两组：实验组（5mg/kgD261）和对照组（含等量DMS0的生理盐水），腹腔给药，每三天检测小鼠体重和肿瘤大小，18天后处死小鼠。实验结果显示：实验组与对照组相比，小鼠体重没有明显变化，实验组肿瘤的体积和重量比对照组有明显的变小。说明D261能在体内抑制肿瘤细胞的生长。