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番茄黄化曲叶病是近年来在广东番茄上新发生的一种病毒病，已给番茄生产造成较大损失。广东番茄黄化曲叶病毒(Tomatoyellow leaf curl Guangdong virus，TYLCGuV)是引起该病害的主要病原病毒之一。
TYLCGuV是本研究室在广东发现的菜豆金色花叶病毒属一个新种，其基因组仅含有DNA—A组分，至今未发现DNA—B组分和DNAβ分子。该病毒与广东番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Guangdong virus，ToLCGuV)亲缘关系最近，二者DNA—A的序列同源率为87.9％，在其编码的6个ORFs中，AC4基因同源率变异最大。通过分子检测证实了TYLCGuV是目前引起广东番茄黄化曲叶病的优势病原病毒。
本研究通过侵染性克隆技术及农杆菌共浸润试验分析了AC4基因在TYLCGuV致病过程中的作用，初步明确了该基因的功能，为进一步解析其遗传变异的病理学意义，进而开展该病害的控制对策研究奠定了基础。本研究取得了如下进展：
1.开展了TYLCGuV毒源病样的分子检测和分离物G32基因组克隆。应用菜豆金色花叶病毒属病毒通用简并引物AV494和CoPR，对室内保存的TYLCGuV各病样进行PCR检测，均能成功地扩增到570 bp的特异片段，说明这些病样中存在菜豆金色花叶病毒属病毒。进一步用TYLCGuV特异引物TC和TE进行PCR检测鉴定，上述病样中均可扩增到1427 bp的特异片段，说明这些病样是由TYLCGuV侵染引起的。分离物G32基因组克隆和序列分析结果表明，其基因组仅含有DNA—A组分，全长为2745 bp，含有6个ORFs，与该病毒分离物G3的同源率为96％。
2.成功构建了TYLCGuV—[G32]野生型侵染性克隆pBinPLUS—1.9A。农杆菌介导接种番茄、普通烟和三生烟的结果显示，pBinPLUS—1.9A对番茄具有较强的侵染性，诱导接种番茄植株产生曲叶症状，且从这些显症植株中PCR均可检测到该病毒DNA—A；而接种的三生烟和普通烟植株，虽然也出现类似曲叶症状，但应用PCR未检测到该病毒DNA—A存在，推测pBinPLUS—1.9A可能不侵染三生烟和普通烟。
3.成功构建了TYLCGuV—[G32] AC4基因缺失突变体的侵染性克隆。通过PCR方法引入突变碱基获得AC4基因缺失突变体，进而构建该突变体的侵染性克隆pBinPLUS—m1.8A。农杆菌介导接种番茄、普通烟和三生烟的结果显示，pBinPLUS—m1.8A也能侵染番茄，并产生曲叶症状，但比野生型侵染性克隆诱导的症状轻；而该突变体侵染性克隆与AC4基因的植物表达载体混合接种时，能诱导番茄产生曲叶症状，且比突变体侵染性克隆单独接种的症状要严重，从显症植株中PCR均可检测到该突变体DNA—A存在。同时，单独接种AC4也可以诱导番茄产生类似叶片卷曲症状。这些结果说明，TYLCGuV—[G32] AC4基因是一个与寄主症状诱导相关的致病因子。
4.农杆菌共浸润试验证明了TYLCGuV—[G32] AC4基因具有RNA沉默抑制作用。根据TYLCGuV—[G32] AC4基因的序列设计引物，PCR扩增获得该基因，将其插入到植物表达载体pCAMBIA2300，农杆菌共浸润试验证明该病毒分离物AC4基因编码的蛋白能够抑制转gfp基因本生烟(16c)中GFP诱导的局部沉默，表明AC4基因编码的蛋白是一个RNA沉默抑制子。