MiRNA-132相关的非神经源性胆碱能活性在重症肌无力中变化的研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a294953312
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目的:非神经性乙酰胆碱(ACh)参与调节免疫反应及减轻炎症反应,然而microRNA-132(miR-132)通过靶向乙酰胆碱酯酶(AChE)加强胆碱能抗炎信号通路。到目前为止,ACh和miR-132在重症肌无力中的作用仍然未被探索。我们通过测定外周血单个核细胞内ACh及miR-132的水平,检测胆碱能组分、anti-AChR和anti-MuSK抗体浓度、AChE分解活性及评估QMG评分,探索ACh和miR-132的水平与重症肌无力患者的血清抗体滴度、主要临床特征及预后的关系。  方法:我们于2015年4月至2015年12月期间,从来自天津医科大学总医院、天津市环湖医院、山东省立医院以及天津市第一中心医院门诊及入院的患者中,挑选出符合入组标准的102例重症肌无力患者和50例相符的健康对照。根据美国重症肌无力协会临床分型的标准,我们进一步将入组的重症肌无力患者进行临床分型,并通过已建立的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)成功地检测了102例重症肌无力患者和50例健康对照的外周血单个核细胞内的ACh含量。另外,利用qRT-PCR技术检测外周血单个核细胞内的miR-132和胆碱能组分的表达。并且我们评估了每个病人的QMG评分,检测了anti-AChR和anti-MuSK抗体的水平以及AChE的活性。  结果:  1、ACh检测结果:重症肌无力患者外周血单个核细胞分泌的ACh较对照组有显著的升高(0.168±0.011 vs.0.075±0.002 ng/million cells, p<0.0001),根据美国重症肌无力协会临床分型,尤其是Ⅲ和Ⅳ-Ⅴ亚组升高的更显著(p<0.0001).  2、ACh水平与疾病严重程度关系:ACh的水平与QMG评分呈正相关(r=0.88, p<0.0001)。同时在免疫治疗(如静注免疫球蛋白、血浆置换)后,重症肌无力患者的QMG评分下降(14.20±0.945 vs.9.07±0.650, p=0.0002),并且ACh水平出现下降,有明显的统计学意义(0.286±0.014vs.0.167±0.012, p<0.0001)。ACh的水平与anti-AChR和anti-MuSK抗体的水平呈正相关(r=0.84, p<0.0001;r=0.87, p<0.0001)。  3、AChE活性检测:我们发现细胞内及细胞外的AChE活性在Ⅲ-Ⅴ型重症肌无力患者降低(p=0.0044, p=0.0009),并且细胞内外AChE活性呈线性相关(r=0.58, p=0.0007)。  4、MiR-132表达:与对照组相比,我们观察到miR-132出现了2.6-3.4倍的升高,尤其是在在Ⅲ-Ⅴ型的患者(p<0.0001)。并且miR-132的表达水平与单个核细胞内AChE的活性呈负相关(r=0.48, p=0.0122)。  5、胆碱能组分的变化:AChE和VAChT是下降的,有统计学意义(p=0.0234, p=0.0061)。ChAT是升高的,但没有统计学意义(p=0.5694)。  结论:乙酰胆碱作为一种经典的神经递质,然而目前乙酰胆碱发挥的抗炎作用受到越来越多的关注。通过加强胆碱能抗炎通路,可以减少促炎症性因子的释放。当机体处于炎症或是损伤状态时,机体通过自身调节平衡促炎症性通路和抗炎通路,努力维持内在的稳态,如胆碱能抗炎通路可以调节系统性炎症反应。我们证实的重症肌无力患者外周血单个核细胞内的ACh水平是升高的,并且与重症肌无力的严重程度呈正相关。通过免疫治疗后患者的病情得到一定的改善,同时ACh水平出现下降,我们还发现ACh水平与anti-AChR和anti-MuSK抗体的水平有相关性,说明ACh参与了重症肌无力患者的机体炎症反应。另一方面,miR-132通过靶向AChE加强胆碱能抗炎通路,在重症肌无力患者中也是升高的,提示miR-132也参与机体炎症反应。总之,ACh和miR-132预示着对于重症肌无力潜在的新的研究方向和治疗途径。
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