益气升阳固齿法调节SD大鼠实验性牙周炎微环境免疫应答的研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lonlinyang
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目的:通过“结扎法+高糖饮食+牙龈卟啉单胞菌(Pg)接种+醋酸泼尼松龙注射液”4种方法相结合构建SD大鼠实验性牙周炎模型,用益气升阳固齿汤干预SD大鼠,初步探索益气升阳固齿法对牙周炎的作用。方法:1.建立SD大鼠实验性牙周炎模型:选取8周龄SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,按体重随机分为空白组(Control组)20只,模型组(Model组)40只。适应性喂养2W后,对Model组SD大鼠右侧上颌第一磨牙进行造模,利用牙颈部正畸丝结扎+高糖饮食+Pg菌接种+醋酸泼尼松龙注射液方法,建立慢性牙周炎动物模型。在造模第4W各组处死大鼠4只,检测牙周炎相关指标,牙龈指数(GI)、龈沟出血指数(SBI)、菌斑指数(PLI)、牙周袋深度(PD)。2.益气升阳固齿法调节SD大鼠实验性牙周炎微环境免疫应答的研究:取SD大鼠50只,其中未造模大鼠16只为空白对照组(Control组);已造模大鼠34只,按体重随机分为模型对照组(Model组)16只,实验组(YSGD组)18只。YSGD组灌胃益气升阳固齿汤制备液,制备液浓度为10.5g/kg,每天给药1次,连续给药4W,Control组和Model组给与灌胃等量的生理盐水,其余饲养条件相同。在实验0W、1W、2W、4W各处死Control组、Model组SD大鼠4只,在实验1W、2W、4W各处死YSGD组SD大鼠6只,并分离SD大鼠右侧上颌牙周组织,制备病理切片;HE染色观察牙周组织病理变化;对牙周组织病理切片进行细胞因子IL-1β、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-17的免疫组化染色,并进行图像定量分析。结果:1.通过“结扎法+高糖饮食+Pg菌接种+醋酸泼尼松龙注射液”4种方法相结合对SD大鼠进行牙周炎模型的构建,与Control组相比,Model组4W GI、SBI、PLI、PD均较高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.造模4W观察SD大鼠牙周组织病理学改变,HE染色显示:Control组为正常牙周组织,未见明显异常;Model组可见黏膜固有层细胞坏死,有轻度炎性细胞浸润。3.益气升阳固齿法调节SD大鼠实验性牙周炎牙周组织病理学观察:HE染色显示,0W、1W、2W、4W时,Control组均显示为正常牙周组织,未见明显异常;0W时,Model组牙周组织HE染色可见轻度炎性细胞浸润;1W时,Model组与YSGD组均可见轻度炎性细胞浸润;2W时,Model组与YSGD组可见中度炎性细胞浸润;4W时,Model组可见中度炎性细胞浸润,YSGD组可见轻度炎性细胞浸润。4.益气升阳固齿法调节SD大鼠实验性牙周炎微环境免疫应答的研究:与Control组相比,Model组在0W、1W、2W、4W时牙周组织微环境中细胞因子IL-1β、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-17的表达均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Model组相比,YSGD组在1W时牙周组织微环境中细胞因子TNF-α、PGE2、IL-6的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);在2W时牙周组织微环境中细胞因子TNF-α、PGE2、IL-17的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);在4W时牙周组织微环境中细胞因子IL-1β、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-17的表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.对SD大鼠右侧上颌第一磨进行“结扎法+高糖饮食+Pg菌接种+醋酸泼尼松龙注射液”4种综合方法可在较短时间内快速成功的构建牙周炎动物模型。2.益气升阳固齿法可减少牙周炎微环境中炎性细胞的浸润,减轻牙周组织炎症反应。3.益气升阳固齿法可有效调节牙周炎局部微环境中的免疫应答平衡,下调牙周炎微环境中细胞因子IL-1β、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-17的表达,减少牙周组织损伤。
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