在过去的几年间，手足口病在亚太地区广泛流行，每年影响数百万儿童的身体健康。肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxsakievirusA16，CA16)是引起手足口病的两个最主要的病原体。感染EV71或CA16都可能导致严重的神经系统并发症甚至是死亡。EV71灭活全病毒疫苗已经批准上市，但是灭活EV71疫苗在培养物中的产量很低，而且单独EV71疫苗的免疫不能完全预防手足口病。CA16疫苗研发相对滞后，没有任何候选疫苗进入临床试验。EV71和CA16的病毒样颗粒(virus-like particles，VLPs)作为候选疫苗，已经在昆虫细胞和酿酒酵母表达系统制备出来，并在临床前研究中证实了其安全性和有效性。然而目前生产EV71和CA16 VLPs的表达系统的表现还不能令人满意，特别是在产量和生产程序方面，这些问题都极大地阻碍了未来的产品开发。　　本文第一部分主要评价了CA16 VLPs在巴氏毕赤酵母中的表达情况，并检测了这些VLPs在小鼠感染模型上的保护效果。结果显示，在共表达CA16 P1和3CD蛋白的转基因的巴氏毕赤酵母中，CA16 VLPs可以以相对高的水平表达出来。酵母表达的CA16 VLPs免疫小鼠可诱导出高滴度的血清抗体，可以有效地特异地中和CA16病毒。更重要的是，酵母表达的CA16 VLPs在母源免疫或是血清被动转移试验中均能保护小鼠抵抗致死剂量的CA16病毒的感染。综上所述，这些结果证实巴氏毕赤酵母来源的CA16 VLPs因其良好的临床前效果和适合工业化生产的众多优点，是一种有前景的CA16候选疫苗。　　本文第二部分主要评价了EV71 VLPs在巴氏毕赤酵母中的表达情况，并检测了这些VLPs在EV71小鼠感染模型中的保护效果。结果显示，在共表达EV71 P1和3CD蛋白的转基因巴氏毕赤酵母中，EV71 VLPs的表达量最高可占到总蛋白的4.9％。这些VLPs可以在小鼠中诱导出特异性的中和抗体反应，可以有效中和同源或异源的EV71毒株。更重要的是，VLPs的母源免疫能保护小鼠抵抗致死剂量的EV71病毒的口服感染和腹腔感染。综上所述，这些结果证实了毕赤酵母表达系统可以很简便很高产地表达EV71 VLPs，因此为EV71 VLPs疫苗的商业化开发铺平了道路。　　本文第三部分考虑到VP4蛋白位于衣壳的内部，并在病毒脱衣壳的过程中丢失掉，所以我们探究了VP4蛋白不同程度的截短对EV71 VLPs组装和免疫原性的影响。结果显示，VP4截短20aa、40aa和69aa后，VLPs依然能组装，并且颗粒形态与全长VLPs的相似，虽然产量方面有很大变化。VP4截短的VLPs诱导了和全长VLPs相似水平的EV71特异性的抗体反应和中和抗体反应。而且母源免疫/攻毒试验也证实了三种截短版本的VLPs可以提供和全长VLPs相似的保护效果。综上所述，这些结果证实VP4蛋白部分或完全截短后并没有影响到EV71 VLPs的组装、免疫原性和疫苗效果。