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目的:气道平滑肌表型转换是哮喘气道重塑的重要特征,而前期体外研究发现NF-k B信号通路对其表型转化起到关键性作用。在此基础上,本研究通过在体检测哮喘气道平滑肌细胞表型标志物的改变特征及相关功能改变,探讨NF-kB信号通路对其影响,同时明确干预NF-k B信号通路对哮喘气道重塑、气道高反应性及慢性炎症的作用,为寻找新的哮喘治疗方法提供理论及实验依据。方法:采用腹腔注射和重复雾化吸入卵清白蛋白的方法建立急性及慢性哮喘小鼠模型,NF-kB特异性抑制剂PDTC腹腔注射对哮喘小鼠进行干预;采用BUXCO无创肺功能仪测定各组小鼠气道高反应性;HE染色观察组织大体改变及炎症浸润度;Masson trichrome染色检测胶原沉积情况;免疫组织化学检测气道平滑肌层厚度;通过形态学定量分析对比各组胶原面积及气道平滑肌层厚度;α-SMA和PCNA免疫荧光检测增殖细胞数量;RT-PCR检测肺支气管表型标志物以及COL1A1mRNA表达量;Western-Blot检测磷酸化P65和α-SMA蛋白表达量;RayBiotech蛋白芯片检测血清中炎症因子表达水平。结果:(1)急性及慢性哮喘小鼠气道高反应性指标Penh值较对照组均显著增高,而干预组较哮喘组显著降低;(2)慢性哮喘小鼠平滑肌层面积较对照组显著增高,干预组则有显著缓解;急性哮喘小鼠平滑肌层增厚不显著;(3)气道胶原面积定量急性哮喘各组定量比较亦无显著差别,慢性哮喘模型中,形态定量学分析发现哮喘组胶原面积显著高于其对照组,而PDTC干预后较哮喘组胶原面积显著减少;(4)免疫荧光染色未检出气道平滑肌与PCNA共表达,可见急性哮喘肺内PCNA+的细胞数量较正常组明显增多,主要位于气道以及血管周围,慢性哮喘小鼠未检出增殖细胞;(5)通过qPCR发现慢性哮喘模型中,哮喘组α-SMA、calponin和SM-MHC较对照组显著下降。急性哮喘小鼠模型中,只有calponin在哮喘组中显著下调,PDTC干预组在慢性和急性哮喘模型中均有缓解表型转化的作用,然而calponin在慢性哮喘模型中的下降不能被PDTC干预逆转。Western blot显示PDTC干预后哮喘小鼠phospho-P65表达量显著降低,同时α-SMA蛋白升高。(6)急性哮喘模型中,哮喘组血清G-CSF、IL-6、和IL-17相比正常对照组显著增高,PDTC干预显著降低了G-CSF和IL-6水平,但不影响IL-17。慢性哮喘模型中,哮喘组中只有IL-17和TNF-α显著增高,TNF-α在干预组中显著降低。结论:(1)哮喘模型小鼠气道平滑肌表型转化过程具有时序性,在急性哮喘期,收缩型物质即开始减少,同时伴随细胞功能的早期变化;慢性哮喘则减少更为显著。(2)干预NF-kB通路一定程度上逆转了哮喘气道平滑肌细胞表型转化;(3)干预NF-kB信号通路能一定程度缓解哮喘模型小鼠气道重塑、气道高反应性及慢性炎症等哮喘病理生理特征,可望成为哮喘治疗的新靶点。