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研究目的:在口腔颌面部的肿瘤中,舌鳞癌是较多发的恶性肿瘤之一,因为易浸润性生长、易发生转移等因素,近年来成为了研究者们研究的热点。长链非编码RNA H19(long noncoding RNA H19,lnc RNA H19)在肝癌、卵巢癌、结直肠癌等肿瘤中均有报道和深入研究,而lnc RNA H19在舌鳞癌的发生机制、发展过程中的作用尚未见有研究报道。在表观遗传学相关研究中,lnc RNA H19可以与胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,Igf2)作为一对印记基因在体内发挥作用,同时,lnc RNA H19下游可转录产生一种micro RNA,mi R-675-5p,目前对lnc RNA H19在肿瘤中的作用机制的研究多集中在其与IGF2基因的印记机制上,而关于其本身作为一种长链非编码RNA,以及其下游转录产物mi R-675-5p在肿瘤进展中的研究均较少。同时,G蛋白偶联受体(The orphan G protein-coupled receptors 55,GPR55)是鳞状细胞癌中一个重要的致癌因子,对癌症的增殖、侵袭、迁移具有重要的促进作用。舌鳞癌作为一种口腔颌面部典型的鳞癌,lnc RNA H19与mi R-675-5p及GPR55的相关性如何,其发生发展与GPR55是否相关?因此本研究主要通过在舌鳞癌患者的组织标本中检测lnc RNA H19的表达情况,通过细胞转染构建H19过表达的舌鳞癌细胞系,实时定量荧光核酸扩增检测技术(Real-time Quantitative PCR Detecting System,QPCR)检测过表达lnc RNA H19前后肿瘤细胞系中lnc RNA H19及mi R-675-5p的表达情况,细胞毒性试验(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay,MTT)检测过表达lnc RNA H19后细胞增殖情况,流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI法)检测过表达lnc RNA H19后细胞系凋亡状况,流式细胞仪(PI法)检测过表达lnc RNA H19后细胞周期变化,细胞迁移、侵袭实验(Transwell assay)检测过表达lnc RNA H19后细胞迁移、侵袭能力变化,并通过荧光素酶报告基因实验(Luciferase Reporter Gene Assay)技术检测lnc RNA H19后细胞系中mi R-675-5p、GPR55的关系。以期揭示H19作为一种长链非编码RNA在舌鳞癌中的作用机制,进一步扩宽lnc RNA H19在舌鳞癌中研究在临床中的应用。研究方法:a、本研究在27例舌鳞癌患者的新鲜组织标本中,应用QPCR技术检测lnc RNA H19的表达与相对应的正常癌旁组织的差异;b、通过构建lnc RNA H19-PCDNA3.1(+)载体,利用细胞转染技术,将lnc RNA H19转染进舌鳞癌细胞系CAL27及SCC9中,从而构建过表lnc RNA H19的舌鳞癌细胞系CAL27及SCC9;c、与不进行转染的空白对照组以及PCDNA3.1(+)转染的阴性对照组进行对比观察,QPCR技术检测过表达lnc RNA H19前后肿瘤细胞系中lnc RNA H19及mi R-675-5p的表达情况,MTT实验检测过表达lnc RNA H19后细胞增殖情况,流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI法)检测过表达lnc RNA H19后细胞系凋亡状况,流式细胞仪(PI法)检测过表达lnc RNA H19后细胞周期变化,细胞迁移、侵袭实验检测过表达lnc RNA H19后细胞迁移、侵袭能力变化;d、荧光素酶报告基因技术检测mi R-675-5p与GPR55的相关关系。研究结果:a、27例舌鳞癌新鲜组织标本中,lnc RNA H19的表达量相对于癌旁组织显著降低(P<0.05);b、成功构建过表达lnc RNA H19的舌鳞癌细胞系CAL27及SCC9;c、在舌鳞癌细胞系CAL27及SCC9中过表达长链非编码RHA H19后,相对于空白对照组与阴性对照组,(1)mi R-675-5p的表达增高(P<0.05),GPR55的表达降低(P<0.05)(2)细胞毒性实验:舌鳞癌的细胞增殖能力受到了抑制(P<0.05);(3)细胞迁移实验:舌鳞癌的细胞迁移能力受到了抑制(P<0.05);(4)细胞侵袭实验:舌鳞癌的细胞侵袭能力受到了抑制(P<0.05);(5)细胞周期:舌鳞癌的细胞周期阻滞在了G0/G1期(P<0.05);(6)细胞凋亡:舌鳞癌细胞早期凋亡增加(P<0.05);d、荧光素酶报告基因结果显示mi R-675-5p与GPR55有直接结合位点。结论:a、Lnc RNA H19在舌鳞癌中呈现低表达状态,提示其能作为一种抑癌基因在舌鳞癌的发生发展中发挥作用;b、过表达lnc RNA H19后,舌鳞癌的各项生理活性均受到了抑制(细胞增殖能力降低、细胞迁移能力降低、细胞侵袭能力降低、细胞周期阻滞在G0/G1、细胞凋亡增加),证实lnc RNA H19能通过影响细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力,影响细胞周期和凋亡,从而影响舌鳞癌的发展;c、mi R-675-5p是lnc RNA H19的直接转录产物,同时mi R-675-5p与GPR55有直接结合位点,lnc RNA H19能通过mi R-675-5p,使得GPR55的表达降低。即lnc RNA H19通过mi R-675-5p/GPR55影响舌鳞癌活性。