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前言周围神经的缺损，尤其是长段周围神经的缺损的修复是外科领域的一大难题。随着组织工程材料的不断发展和对于组织工程神经认识的不断深入，使得人工神经的发展成为一个非常有前景的领域。胶元-几丁糖有可能作为人工神经支架的良好材料；激活态雪旺细胞是一种具有高活性、快速增殖的可以显著促进周围神经再生的细胞，是组织工程人工神经良好的种子细胞。本课题将要分三个部分研究为何激活态雪旺细胞有优于正常态雪旺细胞的生物活性?第一部分激活态雪旺细胞信号转导通路的分子构成目的探索激活态雪旺细胞信号转导通路的分子构成。方法用改良成年SD大鼠雪旺细胞培养法培养激活态雪旺细胞(ASC)和正常态雪旺细胞(NSC)，分别用RTK和G蛋白耦联的信号转导通路中的七个抑制剂，Western Blot法检测细胞内的p-ERK1／2水平的改变，比较激活态雪旺细胞和正常态雪旺细胞的信号转导通路的差异。结果光镜下激活态雪旺细胞和正常态的雪旺细胞形态上无差异，S-100染色均为阳性，Western Blot法检测ASC和NSC细胞内的ERK1／2水平无明显的差异，但ASC内p-ERK1／2水平有显著差异(p＜0.01)。在激活态雪旺细胞，使用抑制剂CTX、D609和BAPTA-AM细胞内的p-ERK1／2水平显著降低，而其它抑制剂使用后细胞内的p-ERK1／2水平无明显的改变，差异具有显著性(p＜0.01)；在正常态的雪旺细胞，使用抑制剂U73122和BAPTA-AM，细胞内的p-ERK1／2水平显著降低，而其它抑制剂使用后细胞内的p-ERK1／2水平无明显的改变，差异具有显著性(p＜0.01)。结论激活态雪旺细胞和正常态雪旺细胞是同一细胞的二种不同存在的状态，有活性的p-ERK1／2的水平的升高可能是雪旺细胞激活的关键环节。激活态雪旺细胞和正常态雪旺细胞都是通过G蛋白耦联受体信号转导通路来发挥生物效应的，但是激活态雪旺细胞通过PC-PLC分解磷脂酰胆碱使细胞内的DAG水平的提高来发挥生物效应的，而正常态雪旺细胞则通过PI-PLC信号转导通路发挥其生物效应的。第二部分应用转录因子蛋白／DNA组合芯片技术检测激活态雪旺细胞的活性转录因子目的检测激活态雪旺细胞活性转录因子。方法应用转录因子蛋白／DNA组合芯片技术检测激活态雪旺细胞的活性转录因子。结果激活态雪旺细胞和正常态雪旺细胞的转录因子芯片点阵图显示：激活态雪旺细胞比正常态雪旺细胞有5个转录因子蛋白上调2倍以上，它们是AP-1、NRF-1、NF-Atx、PO-B和PRDI-BF；活化的AP-1蛋白的显著增加可能就是激活态雪旺细胞增殖活性高重要的原因；NF-Atx表达升高可能是协同AP-1的转录表达；激活态雪旺细胞可能通过提高NRF1和mtTFA表达，引起线粒体呼吸链酶蛋白表达升高，线粒体酶活性升高，从而提高线粒体能量代谢，为激活态雪旺细胞的高分泌状态提供能量，促进激活态雪旺细胞的增殖；而PO-G不仅作用于它的靶基因，而且还作用于其它的基因位点，调节转录和DNA的修复和复制。PRDI-BF的升高也与激活态雪旺细胞的特殊的功能密切相关的。结论5个转录因子蛋白上调都与激活态雪旺细胞的快速分裂、高分泌状态密切相关。第三部分应用双荧光素酶报告基因检测系统检测激活态雪旺细胞信号转导通路目的应用双荧光素酶报告基因检测系统检测激活态雪旺细胞信号转导通路。方法采用荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成双荧光素酶报告基因实验系统，构建含NGF-TF与promotor／TRE的启动子的载体，感染激活态雪旺细胞，雪旺细胞的处理则分为7组：1．激活态雪旺细胞空白对照：2．激活态雪旺细胞+0.8μg pGL3+40 ng phRL-SV40；3．激活态雪旺细胞+0.8μg pGL3-NGFpromotor+40 ng phRL-SV40；4．激活态雪旺细胞+0.8μg pGL3-NGFpromotor+40 ngphRL-SV40+加药0.5小时；5．激活态雪旺细胞+0.8μg pGL3-NGFpromotor+40 ng phRL-SV40+加药1小时；6．激活态雪旺细胞+0.8μg pGL3-NGFpromotor+40 ng phRL-SV40+加药1.5小时：7．激活态雪旺细胞+0.8μg pGL3-NGFpromotor+40 ng phRL-SV40+加药2小时。结果从第三组加入活化的NGF的启动子但没有加入抑制剂后，RLU1的数值含有激活态雪旺细胞自身的荧光、海肾荧光素酶的荧光强度和萤火虫荧光素酶作用于底物的荧光强度的总和，因而数值最大，其相对值RLU1／RLU2也是最大，使用信号转导抑制剂D609后，第四组在用药0.5小时后，由于NGF启动子的活化受到抑制，萤火虫荧光素酶作用于底物的强度明显受到限制，表现在荧光强度显著下降。当D609随着时间的推移，逐渐衰减的时候，NGF启动子的活化受到抑制逐渐减弱，萤火虫荧光素酶作用于底物的强度明显增强，表现出荧光强度的逐渐增强。结论通过双荧光素酶报告基因系统可以直观地观察激活态雪旺细胞的信号转导通路的作用效应；直接证明了前面我们的信号转导通路的分子构成的检测结果的正确性。