单核细胞增多性李斯特菌(ListeriaMonocytogenes，Lm)是一种短小的革兰氏阳性无芽胞杆菌，是一种人畜共患病的致病菌，可使人和动物患李斯特菌病；单增李斯特菌为食源感染菌中的低温菌，其生长温度在1～45℃之间，并可在肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等多种食物中生长。 单增李斯特菌中毒在临床上主要表现为脑膜炎、败血症和孕妇流产等，严重的可引起血液和脑组织感染。最近几年，李斯特菌病在发达国家病死率高达20％～30％；在美国，李斯特菌病被列为7种主要的食源性致死病之一；因此引起卫生界的高度重视，被WHO评选为食品安全工作计划检测中的重点食源性疾病之一。检验检疫部门、卫生局、海关、医院等卫生检测防疫部门已经努力构建有关单增李斯特菌的检测方法。 该项研究主要讨论了免疫胶体金技术、PCR检测技术在单核李斯特菌快速检测中的应用。 免疫胶体金层析技术方法构建：采用柠檬酸三钠改良法制备15nm胶体金颗粒，确定标记pH为8.2～9.0之间；单增李斯特菌抗体最适蛋白质添加量分别是：OⅠ型28μg、OⅠ/Ⅱ型28μg、OⅣ型25μg、OⅤ/Ⅵ型16μg、OⅥ型21μg、OⅦ型21μg；运用硝酸纤维膜层析条带、玻璃纤维、吸水材料、PVC底板组装检测试剂条。检测方法：将待检样品与免疫胶体金混合，在层析试纸条上通过层析作用，与固定在硝酸纤维膜上的单核李斯特菌抗体和羊抗鼠IgG发生抗原抗体显色反应。 PCR检测技术方法构建：基于单增李斯特菌特异性的iap基因和hlya基因，建立PCR检测方法，分别设计了引物iap-1和iap-2，hlya-1和hlya-2；在36μlddH2O，5μl10×PCRbuffer，3μl25mmol/LMgCl2，4μldNTPs，0.1μl引物，0.5μl菌液反应体系下，建立适当的反应程序，对两个基因进行扩增检测。实验结果：免疫胶体金技术能有效地对单增李斯特菌进行检测，并具有快速，方便等特点，可制成试剂条运用于各个检疫部门的现场检测，在8～15min内检测出结果，可检验出不同血清型的单增李斯特菌；缺点：对低浓度的单增李斯特菌检测的灵敏度相对较低，在菌体浓度为107cfu/mL以上，检出率高达85.7％，低于这个浓度，不能检出，会产生一定比例的假阴性。PCR技术检测单增李斯特菌具有较高的灵敏度，能够对低浓度的单增李斯特菌实施快速检测；iap基因的扩增检出灵敏度为106cfu/mL；针对hlya基因的扩增检出灵敏度可达104cfu/mL。运用hlya基因扩增可检出，105cfu/mL菌液浓度模拟感染的猪肉；但不能区分不同血清型的单增李斯特菌。 该实验综合了以上两种检测技术，一方面实现了对单增李斯特菌户外快速分析，满足对单增李斯特菌血清型的区分；另一方面又满足了对低浓度单增李斯特菌检测。基本符合国内各相关部门对单增李斯特菌检测的要求，可有效对单增李斯特菌进行检测。