黄果西番莲提物的制备工艺、质量标准研究及与紫果西番莲黄酮成分比较研究

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为了综合开发黄果西番莲(Passiflora edulis f.flavicarpa),基于本项目组在前期工作中对黄果西番莲茎叶提取物(PEFE)的抗焦虑活性的证实,本文致力于考察PEFE的提取工艺,制备具有抗焦虑作用的药用中间体。鉴于黄酮类化合物是黄果西番莲茎叶中所含的重要神经药理活性物质,故选用总黄酮的提取回收率作为优化工艺条件的评价指标。本文首先建立了黄果西番莲茎叶中总黄酮的含量测定方法,接着用正交设计考察了提取溶剂、提取方法、提取溶剂用量等因素对黄果西番莲茎叶总黄酮提取回收率的影响,最后确定PEFE的提取工艺为:以50%乙醇为溶剂,采用三级三次逆流回流提取,材料粉末先用2倍于材料干重的溶剂润湿,再用10倍于材料干重的溶剂提取,每次回流0.5h。   本文还为根据本工艺制备的PEFE制定了质量标准。参照《欧洲药典》5.3版中的西番莲提取物的定性鉴别方法,建立了PEFE的定性鉴别方法,并将显色剂改为便宜易得的AlCl3,得到分辨效果与《欧洲药典》5.3版相似的提取物TLC色谱图。对PEFE的含量测定项,除了测定总黄酮含量外,还建立了指标成分的HPLC含量测定方法,以黄果西番莲中一种含量较高的神经药理活性成分--异荭草素为指标成分,并对该方法进行了方法学考察。结果表明,用该方法测定PEFE中的异荭草素含量,专属性强,线性范围宽,10小时内测定的稳定性好,测定结果准确度较高。由此,为PEFE的质量控制提供了更科学合理的质控指标和方法。本文测定了6批PEFE的总黄酮含量,根据测定结果,参照《欧洲药典》5.3版对西番莲提取物的含量要求,规定PEFE的总黄酮含量不得低于2%;用本文建立的HPLC定量方法,测定了6批PEFE的异荭草素含量,规定PEFE的异荭草素含量不得低于0.5%;此外,还考察了6批PEFE的含水量和灼烧残渣含量,规定PEFE的含水量不得高于5%,灼烧残渣含量不得超过10%。   基于本项目组对可食用西番莲P.edulis的两个亚型的神经药理活性差异的发现,即黄果西番莲的叶具有抗焦虑活性,而紫果西番莲的叶不具有抗焦虑活性,却在高剂量时显示镇静活性,本文采用HPLC法比较研究了这两个亚型的黄酮类化合物组成。结果显示,不同地区采集的紫果或黄果西番莲样品的液相色谱图,出峰很一致,差异很小;而这两个亚型的液相色谱图差异很大;且黄果西番莲提取液的液相色谱图中16-24min之间出现的峰,在紫果西番莲的色谱图中没有;紫果西番莲提取液的液相色谱图中54-90min之间出现的峰,在黄果西番莲中没有;并且,从黄果西番莲中分离得到的六种主要黄酮化合物lucenin-2,vicenin-2,isoorientin,isovitexin,luteolin-6-C-chinovoside和luteolin-6-C-fucoside,在紫果西番莲样品中均未检测到。   本文还引用文献,比较了黄果西番莲与P.incarnata的黄酮类化合物组成和药理作用的相似性,提出黄果西番莲可能作为西番莲提取物的基源植物之一,这将丰富西番莲提取物的植物来源。
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