转OsSec27p和OsARHI基因烟草分子鉴定和不同铁处理的生理指标检测

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OsSec27p、OsARHI是在水稻缺铁胁迫下上调表达基因中与膜泡运输有关的两个基因。本实验室前期对OsSec27p、OsARHI这两个基因进行了分析比对,并获得了这两个基因的全长cDNA;构建了植物表达载体pCAMBIA1302-Sec27p、pCAMBIA1302-ARHI,并将其转到烟草中,获得了OsSec27p、OsARHI的转基因烟草T0和T1代种子。 本论文针对实验室前期的实验成果,对转基因T1代烟草分别在分子水平和生理水平进行分析和鉴定。从三个层次进行分子水平测定,即抗性筛选、基因水平的PCR检测、转录水平的RT-PCR检测和蛋白水平的GFP检测。生理水平上测定观察了形态变化、测定了pH值和植物中的铁含量。 实验结果表明:转基因烟草中确实转入了目的基因片段,并且在植株生长过程中转入的目的基因片段多数没有被剔除;经过使用GFP绿色荧光检测仪对植株进行检测后发现,缺铁胁迫下转基因烟草的叶片GFP表达量相对较高,从而证明在缺铁处理的转基因烟草中转入的目的基因表达量较高;将转基因烟草的叶片和根进行铁含量检测,数据的显示表明在转入OsARHI和OsSec27p两个基因后,烟草对于缺铁胁迫的耐受性得到了一定的增强,根系吸收铁离子更为有效,植物体内输送铁离子的能力有了增强。通过对烟草生长进行观察、统计及研究,发现缺铁胁迫的烟草侧根的数目明显增多,而且植物叶片的黄化现象有明显的改善;而由水培烟草的培养液pH值的变化,可以推测转基因烟草根系会分泌出一些酸性物质,改变培养液的酸碱度,以影响对周围环境铁离子的吸收效率从而适应植物的缺铁胁迫。
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