基于纳米复合材料的电化学生物传感器检测邻苯二甲酸酯研究

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邻苯二甲酸酯(PAEs)是一种塑料制品中常用的增塑剂,主要包括邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸二丙酯(DPr P)等邻苯二甲酸酯类化合物,被广泛地应用于塑料制品中以改善柔韧性,耐用性和透明性。PAEs与聚烯烃塑料分子间由非共价键连接,随着时间的推移,塑料中的PAEs很容易在生产,使用,处置过程中迁移至食品中从而进入人体。然而PAEs能够干扰内分泌且具有致突变、致畸及致癌的危害。因此,建立对PAEs的分析检测方法具有一定的现实意义。电化学分析技术具有响应速度快,使用方便,易与其它测试、控制技术联用等优点。本论文利用抗体作为识别元件,通过合理利用纳米复合材料、传感器构建方式及生物信号放大策略建立了快速灵敏检测PAEs的电化学生物传感器,取得了优异的结果。具体研究内容如下:首先,采用无标记直接型传感器构建方式对DPr P进行检测。先通过简单的水热法合成了具有皱褶片状结构和大比表面积的二硒化钴(Co Se2),利用聚乙烯亚胺(PEI)功能化Co Se2使其带有氨基,通过Au-N键与金立方体(Au NCs)复合合成Au NCs/PEI-w-Co Se2修饰于电极表面。作为识别探针的抗体固定在Au NCs上,DPr P通过抗原-抗体相互作用与抗体结合后形成免疫复合物,进而阻碍电极表面上氧化还原探针[Fe(CN)6]3-/4-的电子转移导致电流减小,通过差分脉冲伏安法(DPV)对DPr P进行检测研究。所构建的传感器在1×10-11 mol·L-1至1×10-5 mol·L-1DPr P浓度范围内呈线性响应关系,相关系数为0.995,检测限为1.39 mol·L-1,加标回收率为95.18%至101.10%。这种制备好的免疫传感器构建方式简单,实现了对DPr P的灵敏检测。其次,构建标记型传感器以改善无标记型传感器背景峰电流值较大的问题,采用竞争型免疫传感器构建策略,同时采用金铂核壳(Au@Pt)负载硫堇(Thi)标记抗体以扩增信号,同时利用差分脉冲伏安法(DPV)和方波伏安法(SWV)响应模式构建了灵敏的双模式电化学免疫传感器用于定量测定DBP。根据二乙烯三胺(DETA)辅助水热法,制备了一种新型的N掺杂石墨烯/Co Se2纳米带复合材料。之后,将PEI功能化的NG-Co Se2和金纳米线(Au NWs)进一步复合,作为免疫传感器的初步信号放大平台。负载有Thi的Au@Pt和二抗(Ab2)连接作为信号标签。固定的包被抗原DBP-BSA和DBP竞争有限的抗体结合位点。通过DPV检测负载在Thi-Au@Pt-Ab2标签上的Thi信号来确定DBP的浓度。还可以通过SWV模式检测由具有过氧化物酶性质的Thi-Au@Pt催化H2O2和邻苯二胺(o-PD)反应系统产生的电流来确定DBP的浓度。在最佳条件下,DPV和SWV模式的线性响应范围为1 pg·m L-1至1μg·m L-1,相关系数分别为0.994和0.958。检测限分别为0.486 pg·m L-1(DPV)和0.711 pg·m L-1(SWV),加标回收率分别为95.79%至109.30%和98.73%至105.33%。同时,双模式的检测策略增加了检测结果的准确性,为小分子靶物质的免疫检测提供了新创想。第三,使用多功能纳米复合材料修饰传感器以大幅改善传感器性能,同时引入金属离子依赖性DNA酶介导的DNA步行机策略将单一识别-信号响应系统改善为多个信号分子响应系统以进一步增加标记型生物传感器的灵敏度。我们以镁离子依赖性DNA酶驱动DNA步行机策略进行信号放大,聚多巴胺功能化还原氧化石墨烯与铂钯核壳的复合材料(Pd Pt/PDA-rGO)作为电极修饰材料,负载有亚甲基蓝(MB)并具有催化性的介孔四氧化三铁@铂钯纳米粒子(Fe3O4@PtPd)和DNA链连接作为信号标签标记的竞争型免疫传感器。将人工抗原与含Mg2+依赖性DNA酶序列的DNA链相连,其与DBP竞争结合电极表面有限的抗体。在该DNA步行机策略中,循环利用Mg2+进行剪切导致信号标签数量减少,通过SWV测得MB信号变化来监测DBP浓度。另外,Pd Pt/PDA-rGO为竞争型免疫传感器提供了增强导电性的作用,Fe3O4@PtPd对MB信号催化作用使得信号进一步放大,从而实现信号扩增。该免疫传感器在0.1 pg·m L-1至0.1μg·m L-1DBP浓度范围内呈线性响应关系,相关系数为0.999,检测限为7.05 fg·m L-1,并且在加标白酒回收率达到93.67%至103.02%。这种制备的免疫传感器策略可以提供一种有效的方法来改善信号放大,这也为提高其他分析物检测的灵敏度开辟了道路。
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