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目的:
本研究观察(1)OX40-OX40L相互作用对C57BL/6小鼠脾淋巴细胞增殖、细胞培养上清中IL-2、IL-4、INF-γ细胞因子含量及淋巴细胞中活化T细胞核因子C1(NFATcl)表达的影响,(2)用环孢素A(CSA)阻断NFATcl后观察OX40-OX40L对脾淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IL-2、IL-4、INF-γ细胞因子表达的影响。探讨OX40-OX40L相互作用是否通过NFATcl促进小鼠脾淋巴细胞活化。
方法:
取C57BL/6小鼠脾淋巴细胞,以不同浓度刺激型OX40抗体上调OX40-OX40L相互作用,另以不同浓度抑制型OX40L抗体下调OX40-OX40L相互作用,不同时间点收获细胞,应用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖;ELISA法检测细胞培养上清中IL-2、IL-4、INF-γ细胞因子含量;以实时荧光定量PCR检测细胞培养上清中INF-γ在mRNA水平的表达;流式细胞技术检测淋巴细胞中NFATcl蛋白表达水平。
结果:
(1)anti-OX40特异性刺激OX40-OX40L轴后,小鼠脾淋巴细胞增殖增强,分泌IL-2和INF-γ含量明显增加,IL-4含量无明显变化,淋巴细胞中NFATcl蛋白表达明显上调,anti-OX40(20μg/ml)时刺激作用最强,刺激时间48h最佳。
(2)anti-OX40L特异性阻断OX40-OX40L轴后,淋巴细胞增殖、分泌细胞因子IL-2和INF-γ含量及淋巴细胞中NFATcl蛋白表达明显受到抑制,anti-OX40L(100μg/ml)时抑制作用最强,抑制时间48h最佳。
(3)用CSA阻断NFATcl后,OX40-OX40L刺激脾淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IL-2、INF-γ细胞因子的表达明显受到抑制。
结论:
OX40-OX40L相互作用通过NFATcl促进小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的表达。