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目的:MicroRNA(miRNA)是一类调节基因表达的小分子单链非编码RNA,通过与靶基因的3′UTR区互补配对,对靶基因mRNA进行切割或者翻译抑制,能够广泛参与多种生物学过程,包括病毒感染。其中,miR-122可以促进丙型肝炎病毒复制。本研究通过研究miR-122与博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)的相互关系,探讨miR-122在不同类型病毒的持续感染形成以及宿主固有免疫的调控过程中的作用机制。方法:本研究用OL、OL/BDV细胞miRNA基因芯片确定目标miRNA(miR-122),应用real-time RT-PCR方法检测miR-122在OL、OL/BDV细胞中的表达水平,并与Huh7,HepG2和C6等多种细胞进行比较。将BDV N、P蛋白真核表达载体转染OL细胞,检测BDV中对miR-122起作用的病毒蛋白。根据RNAhybrid软件预测miR-122与BDV mRNA的互补结合情况,将BDV N、P蛋白真核表达载体与miR-122重组质粒共转染OL细胞,检测miR-122对病毒蛋白翻译过程的影响。通过miR-122过表达以及miR-122抑制物封闭实验,采用western blot和real-time RT-PCR进一步检测miR-122对OL/BDV细胞中BDV翻译以及复制转录的影响。同时,通过miR-122过表达以及miR-122抑制物封闭实验,用real-time RT-PCR检测miR-122对OL、OL/BDV细胞中内源性IFN-alpha、IFN-beta合成的诱导作用及其与柯萨奇病毒B (Coxsackievirus B, CVB)、polyI:C及外源性IFN诱导内源性IFN途径的相关性。结果:①在目前已知的文献报道的对病毒起调控作用的miRNA中,只有miR-122的表达在OL和OL/BDV细胞中出现明显差别;②miR-122在OL细胞中呈中等量表达,其表达水平低于Huh7,但明显高于HepG2,而在OL/BDV中的表达明显低于OL细胞;③BDV中的N、P蛋白对miR-122有明显的抑制作用;④RNAhybrid软件预测显示miR-122与BDV N、P mRNA可以互补结合,其中与N mRNA的结合位于5′端,与P mRNA的结合多位于3′端;⑤在OL/BDV细胞及BDV N、P蛋白真核表达载体和miR-122重组质粒共转染的OL细胞中,miR-122能够特异性抑制BDV P蛋白的翻译,但对N蛋白没有明显作用;⑥在OL/BDV细胞中,miR-122过表达能够特异性抑制BDV N的复制和转录,但对P没有明显作用;⑦在OL/BDV细胞中,IFN-alpha和IFN-beta的表达水平明显低于OL细胞,miR-122具有特异性诱导内源性IFN-alpha和IFN-beta的作用;⑧在OL和OL/BDV细胞中,抑制miR-122的表达可以特异性阻断CVB、polyI:C以及外源性IFN对内源性IFN的诱导作用。结论:以上结果表明,在OL/BDV细胞中,miR-122具有抗BDV作用。这种抗病毒作用可能是通过miR-122直接对P蛋白的靶向抑制作用,进而影响聚合酶活性,抑制BDV的复制,也可能通过诱导内源性干扰素升高而参与抗病毒作用。本研究提示,BDV、miR-122和IFN之间存在着一定的平衡关系,这种平衡可能导致了BDV在细胞中的持续感染。