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当前,我国蛋成品的消耗量日益增多,关于禽蛋品的食用及开发利用方面,大家一贯都是仅仅用了可直接食用的鸡蛋清和鸡蛋黄,将没能够食用的大批量鸡蛋壳随意扔掉。若这些蛋壳得不到妥善处理,久而久之就会给环境带来一定影响,造成环境影响这一社会问题急需得到解决,蛋壳资源的合理化利用已迫在眉睫。事实上,蛋膜中蛋白含量非常丰富,是潜在的多肽和氨基酸资源。因此,本课题试验在蛋壳膜的综合利用方面展开了系统的研究工作。以鸡蛋壳膜为试验基本原材料,用中性、碱性、胰和木瓜蛋白酶对蛋壳膜进行酶解,将酶解所得到的酶解液分别对Chicken E.coli、S.aureus、P.aeruginosa、S.typhimurium、S.dysenteriae、A.hydrophila、Enterotoxigenic E.coli和P.multocida进行抑菌试验,结果得出碱性蛋白酶酶解液的抑菌效果要比其他蛋白酶酶解液抑菌效果好,然后分析了酶解过程中的碱性预处理、酶解温度、酶解时间、加酶量、酶解p H五因素对鸡蛋壳膜酶解液抑菌效果的影响。通过单因素试验,结合Design Expert 8.0.6分析软件,运用Box-Behnken中心组合设计进行响应面法(RSM)优化酶解工艺条件。最佳酶解工艺条件优化试验结果为:酶解温度45℃、酶解时间2h、酶用量37.51u/mg、酶解pH 10.14。该最优工艺条件下,鸡蛋壳膜酶解液对S.typhimurium的抑菌圈直径为17.927±0.19mm,与理论最优值17.941±0.21mm接近,抑菌效果比优化前提高了10.52%,说明拟合方程与实际相符合,所得结果准确可靠。进一步,本课题试验选取了较适合的两种酶进行双酶法酶解蛋壳膜生产抗菌多肽,以S.typhimurium为指示菌检测复合酶解液抑菌活性,对复合酶酶解的条件进行优化试验,通过正交回旋旋转组合探讨复合酶解的最佳工艺条件。复合酶酶解正交工艺条件优化(加酶比例为:1:1)结果为:中性蛋白酶+碱性蛋白酶、酶解温度:40℃、酶添加量2%、酶解时间4h、酶解PH值10。其次,对蛋膜酶解液进行初步分离纯化及鉴定,本研究通过Tricine-SDSPAGE蛋白凝胶电泳分析酶解液的分子量大小,然后利用Sephadex-G25凝胶过滤层析(分子筛)进一步分离纯化。经Tricine-SDS-PAGE电泳,确定抑菌活性分子大小在7kD左右。