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目的构建牛乳源性金黄色葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白(N-terminalelastinbindingproteinsofS.aureus，nEBPS)原核表达系统，并对其表达蛋白进行抗原性研究。 方法提取金黄色葡萄球菌临床分离菌株的基因组总DNA，参考GenBank公布的金黄色葡萄球菌nEBPS基因序列，利用DNAStar生物信息学软件中Protean功能预测nEBPS基因的抗原表位、亲水性和抗原性指数等参数，应用Primer5.0和Oligo6.0生物信息学软件设计克隆引物，经PCR克隆nEBPS基因序列，将其克隆至pET-30(a)表达质粒的多克隆位点(MCS)，构建重组表达质粒nEBPS-pET-30(a)，将nEBPS-pET-30(a)转入E.coli/BL21(DE3)中构建重组工程菌，用IPTG诱导表达，通过SDS-PAGE电泳分析表达蛋白图谱。再用Western-blot验证免疫反应原性;利用Ni2+亲和层析纯化重组的蛋白，并建立检测免疫抗体的间接ELISA方法，对金黄色葡萄球菌nEBPS表达蛋白免疫家兔血清抗体滴度进行检测;制备金黄色葡萄球菌原生质体，利用间接荧光抗体技术对其细胞膜表面nEBPS蛋白进行定位检测。 结果经测序和酶切鉴定表明，成功克隆了金黄色葡萄球菌nEBPS基因序列，成功构建原核表达系统并进行高效表达，表达蛋白的相对分子质量为34KD，蛋白表达量占菌体总量的42.6％，可溶性表达量达到46.5％，纯化蛋白含量达到2.08mg/mL。Western-blot结果表明，重组蛋白有良好的反应原性。间接ELISA检测3免后第58d的家兔血清抗体，其滴度达到1∶5100，免疫70d后抗体滴度仍能达到1∶4500。经制备金黄色葡萄球菌原生质体细胞，利用间接荧光抗体技术检测膜表面nEBPS蛋白，结果表明该蛋白为膜表面蛋白。 结论成功克隆了牛乳中金黄色葡萄球菌nEBPS基因序列，该序列的长度为720bp，编码240个氨基酸残基，构建的重组表达系统获得高效可溶性表达;建立了检测金黄色葡萄球菌免疫抗体滴度的间接ELISA方法;金黄色葡萄球菌nEBPS蛋白为膜表面蛋白。