人巨核白血病细胞系HIMeg诱导分化前后差异表达基因的mRNA差别显示和克隆

来源 :第二军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhoudm2005
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该研究以人巨核白血病细胞系HIGeg为模型,鉴定诱导分化前后表达有差异的基因,以期从中找到细胞分化过程中的关键基因.HIGeg细胞经13-顺式维甲酸诱导分化4天后,收集分化前后的细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,再利用mRNA差别显示(mRNA DD)技术,寻找分化前后表达可能有差异的cDNA片段,共取28个候选cRNA片段,经RNA点杂交分析后发现其中21个(75%)为假阳性,5个(18%)因没有杂交信号而无法确定,只有2个(7%)的表达真正有差异.这两个片段被分别命名为MDI-1(分化后表达下降)和DNS-1(分化后表达升高).Northern印迹分析证实了点杂交的结果,并提示两者对应的mRNA全长分别为6kb和1.5kb左右.MDI-1测序结果表明这个片段长351bp.DNA序列分析未发现同源性高于55%的已知灵长类核苷酸序列,提示MDI-1是一个未知基因的一部分.
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