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目的:皮肤恶性黑色素瘤是一种具有多基因病因的复杂异质性癌症,是皮肤癌相关死亡的主要原因,更令人不安的是过去几十年来疾病发率的稳步增长。目前,手术切除仍然是具有早期低风险特征的唯一治疗方法,但面对高失败率的手术,疫苗的辅助治疗越来越受到重视。癌症疫苗可以通过激活身体特异性免疫应答来降低肿瘤生长速率甚至诱导肿瘤细胞凋亡,但疫苗的免疫原性较低,很难引起机体的免疫应答。佐剂是可以帮助调节和增强免疫反应的化合物或大分子复合物,它们与疫苗或肿瘤细胞组合以改善其功效并增加抗原特异性反应。此外,它们能够通过促进效应淋巴细胞归巢,从而增强功能性抗肿瘤细胞对实际肿瘤部位的作用。黄芩素是具有多种生物活性的黄酮类物质,它具有多种生物学功能,除了可以清除体内的氧自由基外,还可以改善血液循环,降低胆固醇等功效,但其作为佐剂应用的研究,还未见报道,所以,在本研究中,我们建立了小鼠黑色素瘤模型,以检测黄芩素对免疫后荷瘤小鼠的T细胞的免疫应答效果,确定黄芩素是否可以作为黑色素瘤的佐剂。研究方法:在实验中,我们以不同浓度的黄芩素(50mg/kg、100 mg/kg)与灭活的黑色素瘤细胞B16F10作为实验组,将弗式完全佐剂与灭活的B16F10作为阳性对照,同时,设计了不同浓度的黄芩素组(50 mg/kg、100 mg/kg)和单独的灭活的B16F10组,我们将C57BL/6小鼠分为8组,每组10只,初次对每组进行免疫,并在两周后再对每组小鼠强化免疫一次,一周后对每组小鼠进行皮下接种B16F10肿瘤细胞,构建黑色素瘤小鼠模型,然后我们检测荷瘤小鼠的肿瘤大小和小鼠存活率,并检测了来自不同组小鼠的CD4+T细胞和CD8+T细胞分泌的细胞因子,最后检测CD8+T细胞的杀伤情况,综合以上结果,评价黄芩素作为佐剂对黑色素瘤的抑制情况,并确定黄芩素的浓度。结果:流式细胞术分析显示,不同浓度的黄芩素可上调CD4+T细胞分泌的细胞因子IL-2和TNF-α,其中100 mg/kg的黄芩素和灭活的B16F10肿瘤抗原组在上调细胞因子表达上更明显,不同浓度的黄芩素可上调CD8+T细胞中细胞因子TNF-α和IFN-γ的表达,而且,注射100 mg/kg的黄芩素和灭活B16F10组的小鼠存活率较高,肿瘤生长较慢。在细胞增殖实验中,与注射灭活的肿瘤细胞组相比,注射100 mg/kg的黄芩素与灭活B16F10的组和阳性对照组的细胞抗原均显著增加。结论及意义:50 mg/kg和100 mg/kg的黄芩素都能不同程度的上调CD4+T细胞和CD8+T细胞分泌的细胞因子,其中,100 mg/kg的黄芩素作用效果更好,因此,100 mg/kg的黄芩素对体内T细胞的活化有较强的作用;并且,100 mg/kg的黄芩素作为佐剂能够提高T细胞的增殖和杀伤活力;50 mg/kg和100 mg/kg的黄芩素作为佐剂都能抑制黑色素瘤的生长,其中,100 mg/kg的黄芩素抑瘤效果更好,所以,100 mg/kg的黄芩素作为佐剂能够抑制黑色素瘤的生长;100 mg/kg的黄芩素作为佐剂能够提高小鼠的存活率。所以,100 mg/kg的黄芩素有可能成为具有潜在应用价值的肿瘤疫苗佐剂。