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目的:
胆管再狭窄是局部胆管损伤后的一种修复反应，是多种细胞因子和生长因子介导的局部胆管重建和再塑，是胆管平滑肌细胞的迁移、增殖、凋亡及细胞外基质分泌和堆积的结果，是多种细胞及分子表达共同引起的胆管功能与结构的改变。胆管再狭窄的处理是胆道外科的一大难题，因此对胆管再狭窄机制及防治的研究是目前最重要的研究领域。胆管腔内放射治疗预防胆管再狭窄已放射出热情和希望，许多研究证实了放射预防管腔再狭窄的有效性与可行性，但其预防胆管再狭窄及分子生物学机制的研究甚少。
该研究以开发国产放射性支架为目的，通过动物实验在体内探讨国产103pd(103钯)镍钛记忆合金胆道放射性支架防治胆管再狭窄的有效性，和其抑制胆管再狭窄的细胞及分子生物学机制进行研究，为国产放射性支架的临床应用奠定基础。
材料与方法:
实验动物为健康的本地杂种犬12只，体重(15～20)kg，根据不同的处理对其分组，其中6只为普通支架组，6只为103pd放射性支架组；在动物麻醉后，切开腹壁和十二指肠，找到十二指肠乳头胆总管开口，将Forgort气囊导管插入胆总管内进行球囊扩张术，将犬胆总管壁损伤，然后用胆管支架推送器将普通支架和103pd放射性支架分别送至各组犬目标的胆管段内。术后30天处死各组动物，快速取出胆管，并分别用2.5％戊二醛和中性福尔马林进行原位固定，采取胆管标本进行以下测定：
1.H-E染色：将胆管内螺旋镍钛记忆合金支架旋转取出，标本经固定、脱水、石腊包埋后，行连续切片，行H-E染色，用计算机图象分析仪测量两组犬胆管腔面积、粘膜厚度、管腔周径和狭窄程度。
2.平滑肌细胞凋亡的检测：应用酚氯仿提取法在冻存的胆管组织中提取DNA，去除RNA后于0.7琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形带，并应用免疫组化方法对石蜡包埋的胆管组织切片进行凋亡细胞的检测，显色后细胞核呈棕褐色的为阳色细胞，于显微镜下判断阳性程度。
3.Caspase-3的检测：应用异硫氰酸胍-酚-氯仿方法提取胆管组织RNA后，逆转录合成cDNA，再进行PCR反应检测胆管组织Caspase-3表达，引物序列如下：
上游：5-CAAAATGGATTATCCTGAAATGGG-3下游：5-CCAGGAATAGTAACCAGGTGC-3用φX174-HincⅡ和φX174/HaeⅢ为分子量标准，取10μlPCR产物在2％的琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下观察电泳结果，照相并存入计算机凝胶分析系统，以GAPDH吸光度指标化Caspase-3的吸光度值，得到Caspase-3的相对含量。
4.应用免疫组化技术检测PCNA、Bcl-2和Fas在胆管组织中的表达，DAB显色后细胞核、浆呈棕黄色的为阳性细胞，于显微镜下判断阳性程度。
5.应用原位杂交方法检测p53在胆管组织中的表达，p53寡核苷酸探针序列如下：
(1)5-CGAGCTCCCTCTGAGTCAGGAAACATTTC-3(2)5-CTGGCCCCTGTCATCTTCTGTCCCTTCCCA-3(3)5-TGAGCGCTTCGAGATGTTCCGAGAGCTGAA-3DAB显色后细胞浆呈棕黄色颜色的为阳性细胞，于显微镜下判断阳性程度。
结果:
1.球囊扩张犬胆管造成胆管损伤，用普通支架和103pd支架预防犬胆管损伤后胆管再狭窄，手术后30天，同普通支架组比较，103pd支架组胆管最大内膜厚度显著减少(78.33％，p＜0.01)。普通支架组和103pd支架组胆管最大狭窄面积百分比分别为(56.54±22.32)％和(23.47±15.65)％，两组具有极显著性差别(P＜0.01)。103pd支架组胆管腔周长及胆管腔面积均比普通支架组明显增加(88.24％P＜0.0l，91.52％P＜0.01)。
2.普通支架组和103pd支架组胆管平滑肌细胞凋亡的检测：以DNA梯状带作为平滑肌细胞凋亡判断标准，普通支架组无DNA梯形带的出现，TUNEL检测仅出现少量阳性细胞。103pd支架组有DNA梯形带或坏死带，TUNEL检测出现较多的阳性细胞出现，两组相比有及显著的差异(P＜0.01)。
3.Caspase-3、Bcl-2和Fas在两组中的表达：Caspase-3和Fas在103Pd支架组表达均比普通支架组明显(P＜0.05)，而103pd支架组Bcl-2表达比普通支架组少(P＜0.05)。
4.普通支架组和103pd支架组p53和PCNA在胆管组织中的表达：103pd支架组胆管组织中p53的表达较普通支架组明显(P＜0.01)，而PCNA在103pd支架组胆管组织中的表达明显少于普通支架组(P＜0.01)，103pd支架组胆管组织平滑肌细胞凋亡率比普通支架组高(P＜0.01)。
结论:
1.103pd支架能较好地抑制犬胆管损伤后胆管内膜的增生，从而抑制胆管再狭窄。
2.在普通支架组和103pd支架组中，Caspase-3和Fas表达在103pd支架组中均增加，且Fas的表达与Caspase-3的表达及胆管平滑肌细胞凋亡相一致，而Bcl-2的表达与Caspase-3的表达及胆管平滑肌细胞凋亡呈负相关。
3.103pd支架组胆管组织中p53的表达较普通支架组明显(P＜0.01)，而PCNA在103pd支架组胆管组织中的表达明显少于普通支架组(P＜0.01)，103pd支架组胆管组织平滑肌细胞凋亡率比普通支架组高(P＜0.01)。说明103pd支架通过使平滑肌细胞凋亡，而抑制犬胆管损伤后胆管平滑肌细胞的增殖，从而可以抑制胆管再狭窄。