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肠道健康对养殖业至关重要。在养殖业不断追求“品质”与“安全”的今天,植物源活性成分因其具有多组分、多功能、多靶点调节机体的生理功能,受到人们的高度重视。植物源活性成分的研究与应用是促进“无抗养殖新时代”健康发展的基础,也是拓展我国兽药研究领域、提高我国兽药产品国际竞争力的重要途径。我国花生资源丰富,花生红衣、花生秧等副产物中植物源活性成分含量丰富,具有挖掘研究价值。原花青素来自于植物的根茎叶中,葡萄籽和花生红衣是其主要来源。葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidin,GSPC)因具有极强的抗氧化和增强免疫功效而被广泛应用,但花生衣原花青素的生物利用度不够,尤其对动物肠道炎症的预防治疗作用目前尚不清楚。因此,本论文在花生衣原花青素提取纯化工艺研究并对其组分结构鉴定的基础上;通过葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的结肠炎小鼠模型,研究了花生衣原花青素对动物肠道炎症的治疗缓解作用;通过构建过敏性结肠炎细胞模型,探讨了花生衣原花青素对结肠炎的干预机制,为动物性肠道炎症的“无抗治疗”提供理论基础。主要研究内容如下:1、花生衣原花青素超声-微波协同提取工艺与AB-8型大孔树脂纯化工艺的研究。在单因素试验、Plackett-Burman设计基础上,利用Box-Behnken中心试验设计建立了PSPC的最佳提取工艺:超声160 W 10 min,微波240 W 90 s,料液比1:40,70%乙醇50℃浸提20 min;建立了良好的提取模型Y=184.20-7.67A+0.8838B+7.47C-1.33AB+4.41AC-1.41BC-5.85A~2-12.62B~2+2.35C~2。在此基础上制备了花生衣提取物PSPE(Peanut Skin Proanthocyanidin Extract,PSPE)。在上样浓度1.2 mg/m L、p H 3、流速1.0 mg/m L;吸附180 min、解吸40 min、解吸流速1.0 mg/m L的条件下确定了AB-8大孔树脂的纯化工艺,并在此基础上制备了PSPC(Peanut Skin Proanthocyanidin,PSPC)。为花生衣原花青素在养殖业中应用研究提供基础。2、花生衣原花青素初步功效评价及组分鉴定。利用体外抗氧化评价体系初步评价了PSPC的抗氧化能力,显示在羟自由基清除、DPPH自由基清除和FRAP值抗氧化能力上,其优于葡萄籽原花青素;利用紫外/可见光谱分析表明纯化物属于PC类;傅里叶红外和核磁共振波谱分析表明其主要结构单元是原花青定;UPLC-QTOF-MS/MS分析表明其包含儿茶素、原儿茶酸、A型PC二聚体、三聚体和四聚体和B型PC四聚体;结果表明,研究得到的PSPC具有良好的抗氧化能力,组分中富含A型PC低聚体。3、花生衣原花青素对结肠炎小鼠肠道炎症缓解作用研究。利用DSS诱导型结肠炎小鼠模型评估PSPC和PSPE对动物肠道炎症的治疗功效。研究发现:PSPC和PSPE可以减少DSS诱导的结肠炎小鼠炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的产生和表达,抑制氧化应激标志物MDA的产生及COX-2 m RNA和i NOS m RNA的快速表达,从而缓解肠道炎症反应;PSPC和PSPE可以显著增加GC的数量并促进MUC-2分泌,显著增加Claudins-1蛋白的产生和表达,并同时增加Occludin m RNA和ZO-1 m RNA的表达,有助肠道黏膜屏障保护功能的恢复;病情症状结果显示,PSPE和PSPC干预下,结肠炎小鼠肠道DAI评分、体重下降、结肠缩短、便血等症状均有缓解。结果证实了PSPC和PSPE对DSS诱导型结肠炎小鼠肠道炎症具有缓解治疗作用。4、花生衣原花青素对结肠炎小鼠Microflora GUT的影响。利用Microflora GUT16S r RNA测序分析技术,研究了DSS诱导型结肠炎小鼠Microflora GUT的多样性、丰度、相似性、功能性、差异菌属等的变化;并且通过气相色谱测定SCFAs的产生情况;利用Deeptools plot Corrlation数据分析技术对肠道炎症和Microflora GUT特征指标进行相关性分析,探讨PSPC和PSPE对结肠炎小鼠Microflora GUT的调控作用。研究发现:PSPC和PSPE在显著干预氧化应激标志物与炎症因子表达的同时,还显著影响了Microflora GUT的多样性、丰度和组成,并增强了微生物代谢物短链脂肪酸(Short Chain Fatty Acid,SCFA)的产生。结果表明,在结肠炎小鼠体内,PSPC和PSPE通过多靶点作用于肠道炎症的缓解和治疗:既可通过对肠道炎症氧化应激反应及炎症因子的影响,又可通过重塑Microflora GUT并增强SCFAs的生成,实现治疗肠道炎症的目的。5、花生衣原花青素对结肠炎细胞模型干预机制研究。利用麸质蛋白消化物(Digest protein of Gluten,DPG)诱导Caco-2细胞,构建过敏性结肠炎的细胞模型,通过探究PSPC对氧化应激反应及炎症因子表达相关信号通路的影响,阐释PSPC对结肠炎的干预机制。研究发现:DPG诱导细胞产生氧化应激并通过抑制抗氧化防御分子SIRT1、Nrf2,激活NF-κB信号通路,促进炎症反应的发生;同时诱导TGM2上调并增加免疫反应,损坏线粒体膜完整性,引起凋亡蛋白BAX和Caspsae-3异常表达,促使细胞凋亡。在PSPC作用下该过程被明显逆转。结果表明,PSPC通过SIRT1/NF-κB/Nrf2信号通路的调控,阻断DPG诱导过敏细胞产生的氧化应激和炎症反应,提高Occludin的表达,修复受损单层膜。研究在细胞水平上揭示了PSPC干预治疗结肠炎的分子机制。