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目的：尽管对EMT已经进行了很多研究，但是它的病因学仍然是个谜。经血逆流和子宫内膜碎屑异位种植是本病发生的首要因素，其中基质金属蛋白酶及其特异性组织抑制剂发挥了重要作用，尤其是Ⅳ型胶原酶与TIMP-1、TIMP-2间的相互作用不容忽视；MT1-MMP作为proMMP-2的活化剂，是否也参与了内异症的发生尚未见报道。此外，流行病学研究认为，EMT是高度性激素依赖性疾病，雌、孕激素在EMT发生中起着举足轻重的作用，而米非司酮作为孕酮拮抗剂，近年来被用以治疗内异症，因此，本课题在检测MT1-MMP、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在组织及细胞水平的表达和相互作用的基础上，研究雌、孕激素、米非司酮对其表达的影响，以进一步探讨MMPs在EMT中的作用。 方法：1、采用原位杂交技术检测MMP-2、MMP-9、MT1-MMPmRNA在30例正常子宫内膜及29例内异症异位内膜组织中的表达；2、采用免疫组化技术检测MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2蛋白在84例正常内膜及内异症79例异位内膜、48例在位内膜中的表达；3、对6例EMT患者的异位子宫内膜组织及2例子宫肌瘤患者的正常子宫内膜组织进行体外细胞培养，利用MTT法绘制细胞生长曲线，并对正常内膜细胞施以雌、孕激素及米非司酮，用透射电镜观察对混 第四军医大学硕土学位论文5一 一合培养的腺上皮细胞和间质细胞的影响；用计算机灰度分析仪分析内膜细胞MMPZ、MMP－9、TIMPI、TIMP－2蛋白的免疫组化表达；采用流式细胞仪及激光扫描共聚焦仪检测细胞周期的变化及细胞内游离钙离子含量的变化。 结果：1、MTIMMPmRNA在正常内膜中未见阳性表达，在异位内膜中阳性表达率为 26石7％；MMP－2、MMP－gmRNA在正常内膜中低表达，在异位内膜中高表达（P＜0，0门；MT－MMP与MMP－2的表达成正相关，与MMP－9的表达无相关性。2、山MMP－2、MMP－9蛋白：在正常内膜组织中低表达，其中增殖期内膜以强阳性＋表达为主，分泌期内膜以阳性＋表达为主；在异位内膜中高表达，且以强阳性＋干表达为主（P＜0刀1）：在位内膜中＊＊k的表达介于正常内膜与异位内膜组织之间。①TJMP－1、TIMP－2蛋白：在正常内膜中高表达，且分泌期内膜以阳性＋＋表达为主，增殖期内膜以阳性＋表达为主；在异位内膜中低表达且以阳性＋表达为主（P＜0．05）；在位内膜中TIMPs的表达介于正常与异位内膜之间（Pwto刀5）。3、正常内膜中，MMP－2与TIMP－2、MMP习与TIMP－1之间有明显负相关，具有较好的一致性（P＜0刀 1人异位内膜中，MMP《与 TIMP2、MMP．9与TIMP－9之间有关联但不具有一致性。4、体外培养正常子宫内膜细胞与异位子宫内膜细胞相比：＊）正常内膜细胞OD值在对数生长期内明显低于异位内膜细胞o＜0刀5）。①光学显微镜及透射电镜下观察二者在细胞学形态上无差异。（3）细胞周期显示异位细胞PI值＞正常细胞。（4）激光扫描共聚焦仪检测细胞内【C／勺i相差不明显。历）异位内膜细胞表达MMP上、MMP刁高于正常内膜细胞（P＜O刀1）；表达＊＊P1、n＊F2低于正常内膜细胞（P＜0刀1）；正常及异位细胞中MMP2表达均高于MMF90＜0．m）；正常内膜细胞中nM卜1表达高于nMP－二（P＜O．m）异位内膜细胞中TIMP－1表达低于TIMP－二（P＜0．m）。5、雌激素作用下子宫内膜细胞处于增殖期，PI值最大；细胞内K 了轻微下降；MMPS蛋白表达轻度增高，TIMPS蛋白表达明显降低（Pwto刀1），MMPS／TIMPS比值增高。6、孕激素作用下，细胞处于分泌期，G广M期细胞最多；细胞内＊勺i DePart’，lent ofobste’rses and GynaeCtw Xe HOSPital， FMMU 第四军医大学硕士学位论文6一 一明显减少（Prto刀5）；MMPS表达明显降低（P＜0刀1），TIMPS表达明显增高 （P＜0刀 1），且对 MMP－9的抑制作用大于 MMP－2、对 TIMPl的促进作用大于TIMF2（P＜O．们）；MMk／TIMk比值下降。7、米非司酮作用下，细胞增殖缓慢；流式细胞仪检测到凋亡峰；电镜观察到凋亡细胞和坏死细胞；细胞内＊显著增高（Prto刀1）；且能桔抗孕激素对MMPS及TIMPs的作用，对MMP－2的作用强于MMP－9。 结论：l、MTIMMP与MMPZ、MMP－9共同参与了EMT的发生和发展，其中MMPS／TIMPS 比例失衡起着关键作用；在正常及异位病灶中MMP－2一TIMP－2发挥的作用可能大于MMP－9——TIMP刁。2、雌激素抑制TIMPs表达，对MMPs无直接促进作用，致使MMPs／TIMPs比值增高，MMPs降解ECM作用加强，成为＊＊T阳性风险因素：3、孕激素抑制＊＊k表达，促进＊＊k表达，致使 MMPS／TIMPS比值下降，MMPS降解 ECM作用受到抑制，阻碍 EMT进程；4、米非司酮通过阻滞子宫内膜细胞GI—S期的转化、影响DNA合成、而抑制细胞增殖；可增加［C4勺i浓度，诱导内膜细胞凋亡；米非司酮对MMPS及TIMPS的表达无直接作用而是通过桔抗孕激素的作用而实现。