【摘 要】
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黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是目前发现毒性最强的真菌毒素,具有极强的致癌性、致畸性、肾毒性及肝毒性。广泛存在于花生、玉米、谷类等农产品和食品中,是引起食品安全事故的重要因素。利用微生物聚生体对黄曲霉毒素进行降解具有环保、高效、无毒害,降解效果更为稳定等优点,进而可以减少并控制黄曲霉毒素的危害,是解决黄曲霉毒素污染的有效途径及研究热点。目前,国内外对微生物降解AFB1的作用已
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黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是目前发现毒性最强的真菌毒素,具有极强的致癌性、致畸性、肾毒性及肝毒性。广泛存在于花生、玉米、谷类等农产品和食品中,是引起食品安全事故的重要因素。利用微生物聚生体对黄曲霉毒素进行降解具有环保、高效、无毒害,降解效果更为稳定等优点,进而可以减少并控制黄曲霉毒素的危害,是解决黄曲霉毒素污染的有效途径及研究热点。目前,国内外对微生物降解AFB1的作用已有较多研究,但在微生物降解AFB1的机理尤其是降解酶的研究仍不够深入;尤其是对AFB1降解具有特殊优势的微生物聚生体的研究同样缺乏。本研究以四川农业大学雅安校区农场堆肥处表层土壤为材料,通过“外淘汰法”从中筛选微生物,构建了高效降解AFB1的微生物聚生体-MBCA（Microbial Consortium A）;探讨了MBCA对AFB1的降解作用,分析了MBCA的微生物结构组成,并对其AFB1降解酶进行了分离纯化及降解特性的研究。主要研究结果如下:1.MBCA对AFB1具有良好的降解效果,最适培养条件下55℃、pH 7.0,培养120 h对500μg/L的AFB1降解率为92%。MBCA对AFB1的降解能力稳定,具有良好的环境适应性。通过Ion S5TMXL高通量平台测序对MBCA 16S r DNA的V3-V4区进行扩增测序结果表明:热微菌GRM1、嗜热淀粉芽孢杆菌和苍白空气芽胞杆菌三种微生物可能为MBCA降解AFB1的关键微生物。2.MBCA通过分泌胞外酶对AFB1进行降解,其胞外酶粗提液的最适降解条件为pH 8.0、55℃,在此条件下培养72 h对500μg/L的AFB1降解率为91.2%。Cu2+对该胞外酶粗提液的降解能力具有一定的促进作用。3.用硫酸铵分级沉淀和离子交换层析技术对MBCA的AFB1降解酶进行分离纯化,纯化后活性最高的酶的分子量约为66.2 kDa,酶比活力为16.73×103 U/mg,纯化倍数为15.64。经SDS-PAGE检测表明纯化效果良好,双倒数作图法测定该酶的表观Km值为6.91×10-5 mol/L。该酶的最适反应条件为pH 6.0和60℃,Fe2+对酶活具有一定的促进作用。
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