流动注射化学发光免疫传感器结合酶放大策略在环境污染与食品安全领域的应用

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随着人民生活水平和消费观念的不断提升,“绿色健康”已经逐步成为大众精神物质追求的代名词,与此同时食品与环境安全问题引发国民热议。为了能够灵敏又精准地检测环境污染物与食品违禁添加剂,开发一种高效的分析检测方法为大势所趋。流动注射化学发光分析法是一种响应快、操作简便和灵敏度高的检测方法,该法已被广泛应用于医药、食品、环境、农药等与生活息息相关的领域。为了提高该分析检测方法的特异性,将其与免疫分析联用,利用抗原抗体反应为基础,构建流动注射化学发光免疫分析法,极大地扩宽了两者的实际应用价值。在此基础上,本论文提出了一系列在食品违禁添加剂和环境污染物检测的信号放大策略,构建的几种传感器成功用于检测水样以及食品安全领域违禁添加的小分子有害物质——溴布特罗、氯霉素和汞离子,为食品安全和环境污染的研究和应用提供了有效的分析方法。本论文主要包括以下几个方面:一、以羧基树脂珠为固相载体连接抗原,因其具有较大的比表面积及较好的生物相容性,可负载大量抗原。引入高亲和力的多抗与辣根过氧化物酶标记的二抗,可有效地放大化学发光信号,该方法对溴布特罗检测的线性范围为0.001-300 ng mL-1。成功建立了线性范围宽、样品制备简单且灵敏度高的流动注射化学发光免疫传感器检测猪肉和猪饲料中溴布特罗残余。二、制备了分散性良好,粒度均一的二氧化硅纳米粒子并在其表面成功进行改性,合成了修饰有抗体与辣根过氧化物酶的二氧化硅纳米粒子作为免疫探针,极大地提高了酶的负载量。基于辣根过氧化物酶对鲁米诺-对碘苯酚-双氧水体系的信号放大作用,该免疫传感器对氯霉素的测定具有良好的重现性、较快的响应速度和较低的检测限,对氯霉素的响应线性范围为0.0001-100 ngmL-1,并且已成功应用于虾肉和蜂蜜样品中氯霉素的测定。三、提出了一种基于氧化石墨烯-壳聚糖修饰的新型流通池用于流动注射化学发光检测水样中的汞离子。氧化石墨烯-壳聚糖复合物薄膜为固定包被抗原并将辣根过氧化物酶标记的二抗引入鲁米诺-对碘苯酚-双氧水的化学发光反应提供了良好的微环境,可有效增强化学发光强度。该新型自制的免疫传感器具有检测快速、特异性高、线性范围宽等优点,对Hg2+测的线性范围为0.001-300 ng mL-1,并对实际水样中Hg2+的检测取得了良好的结果。该方法的成功开发还可用于检测其他环境污染物,扩大了流动注射化学发光免疫分析法的实际应用范围。
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