胎盘OATP1B3对两种胆汁酸转运特征的研究

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[背景]:胆汁酸由胆固醇转化而来,具有调节胆固醇代谢、促进脂类的消化和吸收、防止胆石形成等重要作用,同时也具有一定的细胞毒性。胎儿肝脏在妊娠中期就能够合成胆汁酸,但缺乏代谢能力。胎盘在母胎间胆汁酸转运中发挥了重要作用。有机阴离子转运体OATPs在人类目前共有11个亚家族被确认。多项研究表明胎盘中OATPs参与了母胎间胆汁酸的转运,而其中OATP1B3可能在胎盘滋养层细胞的转运功能上发挥主要作用。[目的]:研究胎盘OATP1B3对两种胆汁酸的转运作用,为ICP对胎儿危害机制探讨、降低胎儿风险及新靶向药物的研发提供潜在策略。[方法]:用慢病毒载体介导的RNAi技术沉默OATP1B3的表达,用Real-time PCR和Western blot检测干扰效率;用MTT法检测两种胆汁酸对细胞的毒性作用;将正常的和干扰后的Swan细胞分别构建体外单层滋养细胞屏障模型,运用高效液相色谱技术检测两种胆汁酸转运情况。[结果]:(1)MTT法:GCA、GCDCA以10μmol/L、20μmol/L浓度作用24h对细胞无明显毒性作用(P>0.05);(2)慢病毒载体介导的RNAi:a. Real-time PCR检测干扰后mRNA表达下降了94.42%(P<0.05);b.Western blot检测干扰后蛋白表达下降了49.51%(P<0.05);(3)成功构建体外单层滋养细胞屏障模型:平台期TEER值为31.90±1.47Ω;(4)胆汁酸底物转运检测:正常组、阴性对照组、实验组转运曲线形态基本一致,均与空白组不同,实验组对GCA、GCDCA转运量明显低于正常组和阴性对照组。在顶端侧加入起始浓度的GCA/GCDCA,随着时间变化,GCA/GCDCA逐渐从顶端侧被转运至底端侧,当底端侧的GCA/GCDCA浓度高于顶端侧时呈现相反方向的转运。[结论]:(1)GCA、 GCDCA在20μmol/L以下浓度24h内对Swan细胞没有明显的毒性作用。(2)OATP1B3shRNA慢病毒介导的RNAi能特异性抑制Swan细胞OATP1B3mRNA和蛋白水平的表达。(3).人胎盘滋养细胞系中OATP1B3对GCA、GCDCA的转运发挥重要作用。
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