目的]拟建立外周血靶标代谢物分析和代谢物轮廓分析的可靠的实验方法。初步评价冠心病不同临床类型的血清游离脂肪酸、氨基酸水平变化,冠状动脉病变严重程度与外周血代谢物的关系,以期应用代谢轮廓学方法发现与冠心病相关的代谢标志物和危险因子。[方法]采用N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)对FFA进行硅烷化反应,并利用气相色谱质谱联用技术(GC/MS)同时测定冠心病患者血清冻干粉中FFA的含量。通过样品前处理方法并优化衍生化反应条件,建立了采用ECF衍生化GC-MS技术进行冠心病患者和健康人外周血清代谢轮廓学研究的实验方法。入选2010年10月-2011年6月间兰州大学第一医院心脏中心住院的经冠状动脉造影确诊为CAD的患者136例,选择26例健康志愿者作为对照。将CAD患者分为急性心肌梗死组、不稳定心绞痛组、稳定性心绞痛组和对照组。入选的CAD患者均接受选择性冠状动脉造影。使用病变支数和Gensini冠脉病变评分系统评价病变严重程度。进行传统生化代谢物的检测。对入选病例进行代谢轮廓分析和图谱采集与数据预处理。多组间比较采用方差分析,相关性分析使用Pearson,当资料为非正态分布时使用Spearman o将样品FFA和氨基酸各组分的分类信息与共有峰含量组成的数据表导入SIMCA-P+11软件进行多维统计分析即模式识别。模式识别分析采用PCA。[结果]方法学考察结果表明,所建立的代谢靶标和代谢轮廓分析方法具有良好的精密度和重现性以及较高的分辨率,可以实现快速、大通量、进行外周血清代谢靶标及代谢轮廓学分析。冠心病患者包括AMI组、UAP组和SAP组,组间的年龄、性别构成、体重指数(Body mass index, BMI)、合并高血压和糖尿病的比例、目前吸烟的人数比、血清TC、LDL-C、HDL-C以及服用他汀和p受体阻滞剂的比例均无统计学差异(P>0.05)；而在AMI组,血TG较其他组低(P<0.05)；与Control组比较,AMI和UAP组的年龄更大,男性比例也高(P值均<0.01)；冠心病中3组目前吸烟的比例也高于Control组。AMI组、UAP组和SAP组,三组间的病变血管的平均支数无统计学差异(P>0.05)；一支、两支和三支血管病变的比例在三组病人的组间比较也无统计学差异(P>0.05)；但采用Gensini计分,发现AMI组计分高于SAP组(P<0.05),提示和使用病变支数计算来描述冠脉病变严重比较,Gensini计分可能会更敏感,更全面地反映冠脉病变严重性。把年龄、性别、BMI、吸烟、糖尿病、高血压、血脂各组分以及FFA、氨基酸各组分与Gensini计分做直线相关分析,结果显示：Gensini计分与病变支数(r=0.553,P<0.001)、患者年龄(r=0.257,P<0.001)、LDL水平(r=0.178,P<0.05)呈正相关；与血清天冬氨酸水平呈负相关(r=-0.214,P<0.05)。与Contronl比较,AMI组油酸水平升高(P<0.05),其他FFA组分在各组间未见明显差异(P>0.05)；与UAP组、SAP组和Control组比较,AMI组谷氨酸水平(P<0.05)和苯丙氨酸水平(P<0.01)升高。AMI组、UAP组、SAP组和Control组血清样品的PCA得分图显示,AMI组较分散,且与Control组有大部分重合。SAP组样本明显分散。UAP组和control组较集中,但无分离趋势。四组在得分图上没有明显分开,表明四组各组间在代谢谱中未显示出有明显差异。I结论]研究发现血清天冬氨酸水平与Gensini计分呈负相关,AMI时血清油酸、谷氨酸、苯丙氨酸水平升高,提示部分FFA和氨基酸组分与冠状动脉病变和心肌损害有关。研究结果对临床冠心病鉴别诊断、早期判断心肌缺血和心肌损害有一定意义。PCA分析血清代谢物组分,未发现用于指导CAD疾病分类的差异性代谢产物或标志物。I目的]在华法林与当归联合应用增加出血风险或凝血指标异常的具体机制尚不明确的情况下,对华法林与当归联用增加出血风险或凝血指标异常的副作用的分子机理进行研究,从分子水平上对两者合用的安全性进行评价研究。为了进一步探索人血清白蛋白(HAS)与华法林的相互作用以及当归中主要药效成分的影响。[方法]本实验首先采用高效液相色谱(HPLC)分析检测当归中阿魏酸的含量；其次,开展华法林与人血浆白蛋白的相互作用及当归中主要药效成分阿魏酸对其影响的研究,通过荧光发射光谱和同步荧光光谱,研究华法林对HSA荧光光谱的影响,研究其猝灭机制、结合常数、希尔系数、结合模型以及阿魏酸对华法林和阿魏酸结合的影响。I结果]HPLC分析检测结果证实当归中的主要药效成分之一为阿魏酸在当归主流药材中的平均含量为0.76%。通过荧光发射光谱和同步荧光光谱实验,证实阿魏酸可以降低华法林与HSA的结合常数和希尔系数,同时能增加游离态的华法林的血药浓度。模拟人体试验,发现游离华法林的浓度至少增加了50%。[结论1通过分子机制研究表明,当归与华法林联合用药会增加患者出血风险。对于HSA与华法林的相互作用以及阿魏酸对其结合的影响的研究有助于增加对华法林代谢过程的理解,同时为华法林的临床合理应用提供了重要的理论依据。