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目的探讨褐藻胶寡糖(AOS)通过micro RNA-34a(miR-34a)调控D-半乳糖(D-gal)诱导的HT22海马神经元的细胞凋亡及其可能机制。方法本实验应用HT22小鼠海马神经元细胞系,将实验分六组:对照(control)组、模型(D-gal)组、褐藻胶寡糖组(AOS)组、D-半乳糖+褐藻胶寡糖(D-gal+AOS)组、D-半乳糖+褐藻胶寡糖+micro RNA-Negative Control组(D-gal+AOS+miR-NC)组及D-半乳糖+褐藻胶寡糖+miR-34a mimic组(D-gal+AOS+miR-34a mimic)组。D-gal+AOS+miR-NC组、D-gal+AOS+miR-34a mimic组细胞分别用Lipofectamine~TMM 3000转染miR-NC(50n M)和mi R-34a mimic(50n M),4-6h后换液。对照组给予同步换液处理,D-gal组、D-gal+AOS组、D-gal+AOS+miR-NC组、D-gal+AOS+miR-34a mimic组细胞应用D-gal(100mmol/L)干预24小时诱导建立HT22海马神经元细胞凋亡模型。造模后,AOS组、D-gal+AOS组、D-gal+AOS+mi R-NC组、D-gal+AOS+miR-34a mimic组细胞分别给予AOS(100mmol/L)干预海马神经元细胞48小时。干预后应用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测海马神经元细胞凋亡情况;应用RT-PCR检测miR-34a的表达;Western blot检测蛋白:Sirt1、p53、Bcl-2、Bcl-xl和Bax的表达,RT-PCR检测cyt-c、caspase-9和caspase-3的m RNA表达。结果1.细胞凋亡检测结果显示:与control组相比,D-gal组海马神经元细胞凋亡比例明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组相比,D-gal+AOS组海马神经元细胞凋亡比例明显减少,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组海马神经元细胞凋亡比例明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。2.miR-34a的m RNA表达结果显示:与control组相比,D-gal组miR-34a的m RNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组相比,D-gal+AOS组miR-34a的mRNA表达明显减少,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组miR-34a的m RNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。3.Western blot结果显示:与control组相比,D-gal组Sirt1的蛋白表达明显减少,p53的蛋白表达明显增加,差异具有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组比较,D-gal+AOS组Sirt1的蛋白表达明显增加,p53的蛋白表达明显减少,差异具有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+mi R-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组Sirt1的蛋白表达明显减少,p53的蛋白表达明显增加,差异具有统计学意义(p<0.05)。4.Western blot结果显示:与control组相比,D-gal组Bcl-2/Bax、Bcl-xl的蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组相比,D-gal+AOS组Bcl-2/Bax、Bcl-xl的蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组Bcl-2/Bax、Bcl-xl的蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(p<0.05)。5.RT-PCR结果显示:与control组比较,D-gal组cyt-c的mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组比较,D-gal+AOS组cyt-c的mRNA表达明显减少,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+mi R-34a mimic组cyt-c的mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。6.RT-PCR结果显示:与control组比较,D-gal组caspase-9的m RNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组比较,D-gal+AOS组caspase-9的mRNA表达明显减少,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+mi R-34a mimic组caspase-9的m RNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。7.RT-PCR结果显示:与control组比较,D-gal组caspase-3的m RNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组比较,D-gal+AOS组caspase-3的mRNA表达明显减少,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+mi R-34a mimic组caspase-3的m RNA表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。结论AOS通过调控mi R-34a抑制D-gal诱导的HT22海马神经元凋亡,其机制可能与mi R-34a/Sirt1/p53信号通路有关。