介孔生物膜色谱在天然产物活性成分筛选中的应用

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药物筛选是新药开发过程的重要问题,是通过运用合适的筛选方法和筛选技术,从天然产物或者合成化合物中得到目标成分的有效方法。药物筛选的分类包括对药理作用,化合物结构,生物活性的筛选等各个方面。通过有效的药物筛选,可以迅速明确潜在的目标成分,加快新药研发的过程。传统的药物筛选方法存在各种各样的问题,如动物筛选价格昂贵,病理部位和药物作用机制不明,细胞膜色谱筛选技术要求较高,细胞易失活,脂质体色谱法脂质体表面缺少受体,无法研究药物与受体之间的相互作用。因此,找到一种高效,快速的潜在药物筛选方法是如今研究的重点。为解决现有技术存在的问题,本课题研究了一种基于靶点蛋白的介孔仿生物膜色谱方法,将生物膜色谱法与受体色谱法结合,再结合HPLC,既可以研究药物与膜及受体之间的作用,排除非作用杂质成分的干扰,又可以多次重复利用,且制备工艺简单。具体研究如下:第一、以聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物(P123),氯化钾(KCL),硅酸四乙酯(TEOS),1,3,5-三甲基苯(TMB)为原料,制备介孔硅材料。通过调整P123与TMB比例,水热晶化时间,水热晶化温度,搅拌条件,制备尺度可控的介孔材料。第二、以第一步的方案制备介孔硅材料。并通过冰浴方法,负载α-葡萄糖苷酶受体。以大豆卵磷脂(PC)、胆固醇为原料,通过反相蒸发法制备基于α-葡萄糖苷酶受体的介孔生物膜色谱(Mesoporous Biofilm Chromatography,MBC)固定相。对P123与TMB比例,大豆卵磷脂和胆固醇比例,α-葡萄糖苷酶受体吸附时间,吸附溶液p H值,最大负载量进行优化,确定最佳制备方案。并通过傅里叶红外光谱(FT-IR),扫描电子显微镜(SEM)和能量分散光谱仪(EDS)对所得材料进行表征。第三、以米格列醇和阿卡波糖为例,分别改变色谱柱柱温,流动相流速和p H值,研究α-葡萄糖苷酶抑制剂在MBC固定相和空白生物膜色谱固定相上的保留行为的差异,并以非α-葡萄糖苷酶抑制剂作为阴性对照,验证MBC对α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选作用。第四、对不同天然产物中的活性成分的抑制能力进行实验,选取五味子和西青果作为实验对象,最后成功从五味子和西青果提取液中筛选到了活性成分,证明了MBC在天然产物活性成分筛选中的适用性。
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