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骨质疏松症是一种代谢性骨骼疾病,特点是骨量低和骨组织的微结构改变,导致骨脆性和骨折风险增加。随着人口老龄化的发展,骨质疏松症已成为一个世界范围内越来越严重的健康问题。鸡蛋富含多种生物活性成分,包括多不饱和脂肪酸、免疫球蛋白、卵磷脂等,其中鸡蛋黄蛋白是卵磷脂等提取加工的副产物。因此本研究从鸡蛋黄中制备糖蛋白(Egg yolk glycoprotein,EYG),对其基本成分进行分析,并分别以RANKL诱导RAW264.7分化为破骨细胞和前成骨MC3T3-E1细胞为模型评价其抑制破骨细胞形成、促进成骨细胞分化成熟的作用机制,以去卵巢骨质疏松大鼠为模型研究其改善骨质疏松症的作用。主要研究结果如下:(1)EYG的制备与鉴定以鸡蛋黄为原料,制备EYG粗品,采用DEAE-52和Sephadex G-50分离纯化得到EYG,纯度为94.57%,相对分子质量为28045.61 Da;由Gal、Man和Glc-AC三种单糖组成;含有17种氨基酸,其中天冬氨酸和谷氨酸含量最高。(2)EYG抑制破骨细胞分化成熟的作用机制通过用RANKL诱导RAW264.7巨噬细胞建立破骨细胞模型,采用MTT、抗酒石酸酸性磷酸酶染色法、ELISA、q RT-PCR和Western blot等方法评价EYG对破骨细胞分化成熟的影响。结果表明,EYG显著抑制破骨细胞的形成,抑制破骨细胞分泌组织蛋白酶k和基质金属蛋白酶9,并且显著抑制丝裂原活化蛋白激酶(Mitogenactivated protein kinase,MAPK)信号通路关键调控因子ERK2和JNK,核内关键调控因子c-Fos和NFATc1的基因表达,显著抑制NFATc1的蛋白表达。EYG可以通过抑制MAPK信号通路的激活抑制破骨细胞分化成熟,降低骨吸收。(3)EYG促进成骨细胞分化成熟的作用机制以前成骨MC3T3-E1细胞模型,采用MTT、ELISA、q RT-PCR,转录组学等方法分析EYG对成骨细胞增殖分化的影响。结果表明,EYG显著促进成骨细胞的增殖,促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶,一型胶原蛋白和骨钙素,促进矿化结节的形成。EYG可以激活成骨细胞分化过程中的标志性基因COLⅠ、Lrp5、β-catenin、Runx2和BMP-2基因的表达,抑制RANKL基因的表达。转录组学研究表明,EYG组的表达显著上调基因45个,显著下调基因78个,其中在与骨代谢相关的信号通路中,EYG可以上调GF及ECM介导的PI3K-Akt、Wnt和MAPK信号通路。q RT-PCR结果表明,EY-SGP通过激活Wnt信号通路中关键调控因子Lrp5、β-catenin、Runx2、BMP-2的基因表达,调控成骨细胞的分化成熟,促进骨形成。(4)EYG改善去卵巢大鼠骨质疏松以去卵巢骨质疏松大鼠为模型,探究EYG改善骨质疏松的作用。结果表明,EYG显著增加了模型大鼠的骨体积分数、骨皮质密度和骨小梁数量,显著减少骨小梁分离度,从而改善骨质疏松大鼠的骨微结构。EYG显著降低骨吸收标志物血清抗酒石酸酸性磷酸酶、一型胶原C端肽、组织蛋白酶k和基质金属蛋白酶9水平,以及尿液中脱氧吡啶啉、尿钙和尿磷的水平。EYG显著升高大鼠血清中骨形成标志物骨源性碱性磷酸酶、一型胶原羧基端前肽、骨钙素和Runx2的水平。说明EYG显著改善去卵巢大鼠骨质疏松的症状。