机体在大手术、烧伤、外伤或严重感染等应激状态下，有效血容量不足，循环血量重新分配。此时肠道作为内脏器官，其血流量首先减少以保证心脏、脑部等核心器官的血供，对缺血缺氧极敏感的肠粘膜细胞受到缺血的一重打击。当临床复苏后肠道恢复灌注时，肠粘膜细胞即受到再灌注的二次打击。因此肠道缺血再灌注损伤是临床常见并且十分重要的病理生理过程，可以导致肠粘膜屏障功能障碍的发生并加重其演变过程，进而导致肠道细菌易位甚至MODS的发生，影响临床病人的预后。　　肠型脂肪酸结合蛋白(Ⅰ-FABP)是一种特异性表达于小肠细胞的胞浆蛋白质，其血清水平对肠道缺血非常敏感，从而可以用于肠粘膜屏障功能障碍的早期诊断。我们在急性胰腺炎病人中验证了其临床作用。　　鱼油富含n-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)，是目前临床常用的免疫营养物，可以调节炎症反应，改善预后。离体实验研究已证实其对肠粘膜屏障的紧密连接有保护作用。本课题在体研究了鱼油对缺血再灌注损伤下肠粘膜屏障的保护作用，并探索其可能的作用机制。　　第一部分　　肠脂肪酸结合蛋白诊断早期肠功能障碍的临床研究　　目的:急性胰腺炎病人早期即有液体渗出至第三间隙导致血容量不足的情况存在，肠道是第一个代偿器官，首先遭遇缺血，当液体复苏成功后，肠道即有再灌注。肠道的缺血/再灌注损伤可以导致肠粘膜通透性增加，肠功能障碍，发生细菌易位，从而导致胰腺炎的继发性感染。肠型脂肪酸结合蛋白(Ⅰ-FABP)特异性表达于肠道，其血清水平对肠道缺血非常敏感。本实验的目的在于验证Ⅰ-FABP是否可用于临床早期诊断肠功能障碍。　　方法:以发病7天内的急性胰腺炎病人为研究对象。在病人入院第1天、发病第7天以及恢复肠内营养后第3天评价患者的疾病严重程度、胃肠功能障碍程度，并在相应时间点留取血清检测肠粘膜损伤指标(Ⅰ-FABP)、免疫炎症指标(IL-10、CRP)、肠吸收功能指标（瓜氨酸），口服乳果糖、甘露醇六小时后留取小便检测乳果糖/甘露醇比值(LMR)。　　结果:本实验入选32例AP病人，其中7例轻型，25例SAP，病人平均年龄(48±15)岁，胆源性胰腺炎是为主要发病原因(66％)。病人入院时血清Ⅰ-FABP浓度即高于正常值(125±77μmol/L)，其中SAP病人血清Ⅰ-FABP水平高于轻型AP(143±76μmol/L vs59±34μmol/L，P=0.001)，在发病第七天达到最高峰(183±90μmol/L)，恢复肠内营养后第三天有所下降。入院时胃肠功能障碍评分、血清CRP水平以及尿LMR均显著增高，血清瓜氨酸水平较正常下降。对病人入院时各项指标进行相关性分析发现:血清Ⅰ-FABP与胃肠功能障碍评分呈正相关(r=0.367，P=0.039);与瓜氨酸呈显著负相关(r=-0.535，P=0.002);与APACHEⅡ评分呈显著正相关(r=0.559，P=0.001);与ICU滞留时间呈显著正相关(r=0.474，P=0.006)。SAP病人血清Ⅰ-FABP与肠功能障碍评分呈显著正相关(r=0.478，P=0.016)，与血清瓜氨酸水平呈负相关(r=-0.422，P=0.036)，与APACHEⅡ评分呈显著正相关(r=0.463，P=0.020)，与CRP呈正相关(r=0.496，P=0.012)。　　结论:血清Ⅰ-FABP可以反映危重症病人的早期肠屏障功能障碍，并与病人临床预后密切相关。　　第二部分　　n-3 PUFAs保护肠粘膜屏障的动物研究　　目的:鱼油富含n-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)，是目前研究较为深入的药理营养素，在临床应用日益广泛。体外实验证实其可以减轻炎症反应导致的肠上皮紧密连接损伤。本实验目的是研究在体情况下鱼油对于肠道缺血再灌注损伤肠粘膜屏障紧密连接的保护作用。　　方法:1、研究肠道缺血30分钟后不同再灌注时间点血清Ⅰ-FABP水平对肠粘膜损伤程度的诊断作用。实验根据不同再灌注时间分为九组:假手术对照组、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、24小时和48小时组。无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉30分钟后放松动脉夹恢复灌注，制作模型。在相应时间点抽取下腔静脉血检测血清Ⅰ-FABP和炎症介质(IL-6和TNF-α)，并取空肠做HE病理染色观察炎性细胞浸润和绒毛破坏情况。　　2、研究n-3 PUFAs预处理后对于肠道缺血再灌注损伤情况下肠粘膜屏障的保护作用。实验分为四组:对照组、缺血再灌注损伤组、鱼油静脉预处理组和鱼油灌胃预处理组。缺血再灌注损伤组:肠系膜上动脉夹闭30min后恢复灌注2h。鱼油静脉预处理组:尾静脉注射鱼油0.2 g/kg后30min制作肠缺血30 min再灌注2h模型。鱼油灌胃预处理组:鱼油(0.)6 ml/kg晨起灌胃一周后制作肠缺血30min再灌注2h模型。在各组相应时间点留取下腔静脉血检测Ⅰ-FABP浓度，留取空肠段行常规病理检查，留取回肠末段行电镜检查，刮取空肠粘膜提取总蛋白行western blot检查。　　3、研究肠道缺血再灌注损伤后使用n-3 PUFAs对损伤肠粘膜屏障的治疗作用。实验分为三组:对照组、缺血再灌注损伤组和鱼油治疗组。缺血再灌注损伤组:肠系膜上动脉夹闭30min后恢复灌注2h。鱼油治疗组:肠缺血30min后恢复灌流，同时尾静脉注射鱼油0.2 g/kg，再灌注2h后取材。取材同上。　　结果:1、肠缺血再灌注损伤后血清Ⅰ-FABP即较正常对照组明显升高（73.1±8.9ng/ml vs7.8±8.3 ng/ml，P=0.029），再灌注2小时后达到最高峰（436.0±166.2ng/ml）。血清TNF-α和IL-6变化趋势与之相似。常规病理显示再灌注2小时后肠绒毛受损最严重，再灌注4小时后有所恢复，再灌注48小时绒毛完全恢复正常。　　2、鱼油静脉预处理和鱼油灌胃预处理组大鼠肠粘膜病理形态较I/R损伤组有明显改善，血清Ⅰ-FABP水平显著下降，透射电镜显示肠绒毛排列整齐，紧密连接和桥粒结构完整，数量较正常组无明显差异。肠粘膜总蛋白的western blot检查发现I/R损伤大鼠的紧密连接蛋白occludin表达较正常组大鼠显著下降，在鱼油预处理组（静脉组和灌胃组）occludin蛋白的表达都趋于正常。　　3、对肠缺血损伤的大鼠在恢复肠道灌流的同时给予治疗剂量鱼油静脉注射，空肠粘膜病理、回肠电镜检查显示处理后大鼠肠粘膜形态较I/损伤组有改善，绒毛虽有所脱落，但较I/R损伤组损伤轻，紧密连接和桥粒完整，但是形态较正常有增宽变短;血清Ⅰ-FABP水平高于正常对照组，但是较I/R组显著下降;提取肠粘膜总蛋白行western blot检查，发现鱼油治疗组肠粘膜occludin蛋白表达较I/R显著恢复。　　结论:血清Ⅰ-FABP可以用于评价肠道缺血再灌注损伤严重程度。n-3 PUFAs对于肠道缺血再灌注损伤造成的肠粘膜屏障的损伤具有保护作用。　　第三部分　　n-3 PUFAs保护肠粘膜屏障的机制研究　　目的:研究发现，n-3 PUFAs对肠道缺血再灌注损伤时的肠粘膜屏障具有保护作用，但其作用机制尚需进一步研究。Ⅰ-FABP作为细胞内脂肪酸的转运载体，可能在n-3 PUFAs保护肠粘膜屏障中起关键作用。本实验通过研究细胞中Ⅰ-FABP表达和核转录因子PPARγ的活化揭示n-3 PUFAs保护肠粘膜屏障可能的作用机制。　　方法:实验分为五组:假手术对照组，缺血再灌注损伤组，鱼油静脉预处理组，PPARγ激动剂预处理组，PPARγ拮抗剂预处理后鱼油静脉预处理组。缺血再灌注损伤组:肠系膜上动脉夹闭30min后恢复灌注2h。鱼油静脉预处理组:尾静脉注射鱼油0.2 g/kg，30min后制作肠缺血30min再灌注2 h模型。PPARγ激动剂预处理组:15d-PGJ2(0.3mg/kg)1ml/kg尾静脉给药，30min后制作肠缺血30min再灌注2h模型。PPARγ拮抗剂预处理后鱼油静脉预处理组:GW966(1(m)g/kg)1ml/kg尾静脉给药，30min后尾静脉注射鱼油0.2g/kg，30min后制作肠缺血30min再灌注2h模型。在模型制作完成后取材检测血清Ⅰ-FABP，留取末段回肠行电镜检查，刮取空肠粘膜提取总蛋白后western blot检查分析Ⅰ-FABP和紧密连接蛋白occludin的表达;提取核蛋白EMSA法分析活化的PPARγ表达。　　结果:PPARγ激动剂15d-PGJ2对肠粘膜屏障亦有保护作用，表现为血清Ⅰ-FABP水平较缺血再灌注损伤组低，肠粘膜occludin蛋白表达增加。鱼油对肠粘膜屏障的保护作用与Ⅰ-FABP有关，表现为肠粘膜细胞Ⅰ-FABP表达增加;这可能是通过激活PPARγ实现的，表现为核蛋白中活化的PPARγ增加，使用PPARγ拮抗剂后鱼油对肠粘膜屏障的保护作用即减弱。　　结论:n-3 PUFAs对肠粘膜屏障的保护作用可能是通过胞浆Ⅰ-FABP转运脂肪酸活化核因子PPARγ的表达实现的。