目的:探讨氯丙嗪(Chlorpromazine,CPZ)对人宫颈癌Hela细胞体外生长的抑制作用及其相关机制,同时观察氯丙嗪联合抗癌药物顺铂(Cisplatin,DDP)对Hela细胞的体外作用。从而探讨其抗癌疗效,评价氯丙嗪治疗宫颈癌的安全性、可行性,以期对药物治疗宫颈癌提供新思路、新方法。方法:选取人宫颈癌Hela细胞为研究对象。实验分三组,即氯丙嗪、顺铂、氯丙嗪与顺铂联合组。1采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)比色法观察不同浓度的氯丙嗪分别作用24h、48h、72h对Hela细胞增殖的影响,测定吸光度(OD)值。不同浓度的氯丙嗪作用Hela细胞48h后,流式细胞仪检测凋亡细胞百分率、细胞周期的改变以及凋亡基因Bax、Bcl-2表达量的改变; DNA凝胶电泳分析DNA片段的变化。2不同浓度各组药物作用48h后,采用MTT比色法检测对Hela细胞增殖的影响,测定OD值; HE染色分析细胞的形态学变化;链亲和素免疫组化法(S-P法)检测细胞p53的表达量变化。结果:1 MTT结果显示:一定浓度的氯丙嗪在一定范围内能明显抑制Hela细胞的增殖,且随氯丙嗪浓度的升高和作用时间的延长,抑制作用明显升高,呈现出明显的浓度依赖性和时间依赖性。分别用氯丙嗪、顺铂及联合用药处理细胞48h后,氯丙嗪在浓度为10-7mol /L、10-6mol /L、10-5mol/L、10-4mol /L时对Hela细胞的抑制率分别为22.74%、41.69%、51.39%、67.45%,与对照组(加入等量培养液)比较,差异有非常显著性(P<0.01);顺铂在浓度为0.2μmol/L、0.5μmol/L、1. 0μmol/L和2.0μmol/L时对Hela细胞的抑制率为43.88%、48.59%、61.49%和71.52%;两者合用可大大提高对Hela细胞的抑制作用,抑制率分别为49.70%、63.52%、70.42%、76.15%,明显高于单纯应用相同浓度的顺铂组。2流式细胞术结果分析:流式细胞仪检测Hela细胞周期分布和凋亡显示,10-7、10-6、10-5、10-4mol /L氯丙嗪处理Hela细胞48h后,随药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞则逐渐减少,即氯丙嗪可阻滞Hela细胞周期于G1期,该作用呈剂量-效应依赖关系;10-7、10-6、10-5 mol /L氯丙嗪作用Hela细胞48h后,出现典型的亚二倍体凋亡峰,依氯丙嗪浓度增大而逐渐增高,凋亡百分率分别为:5.03%、9.35%、23.85%;流式细胞仪间接分析细胞Bax、Bcl-2的蛋白表达显示,10-7、10-6、10-5 mol /L氯丙嗪作用Hela细胞48h后,Bax的荧光指数FI值随处理浓度增大而逐渐增大,Bcl-2的荧光指数FI值随处理浓度增大而逐渐减小,对于每一种蛋白,其实验组与对照组的FI值,均具有显著性差异(P<0.01)。3 DNA凝胶电泳结果分析:10-7、10-6、10-5、10-4mol /L氯丙嗪处理Hela细胞48h后,提取的DNA表现为典型的阶梯状排列条带(DNA ladder),而对照组则没有出现。4 HE染色结果分析:细胞核染蓝紫,胞浆染粉红色。随药物浓度增大,Hela细胞由不规则形渐变圆,出现核固缩、浓聚、断裂后形成的凋亡细胞,呈致密紫蓝色大小不等的颗粒。顺铂组,当浓度为0.5μmol/L时,可见凋亡细胞;而两药联合组,当顺铂浓度为0.2μmol/L时,便出现上述表现。5免疫组化法(S-P)分析Hela细胞p53基因蛋白表达变化的结果:P53蛋白主要表达于细胞核内。氯丙嗪组,p53蛋白的表达呈升高趋势,当浓度为10-7mol/L时,p53蛋白染色细胞核的光密度值(OD)为0.1240±0.0551,当浓度升高至为10-5mol/L时,OD值为0.2020±0.0626,与对照组比较,差异具有显著性( P < 0.01)。顺铂组,p53蛋白的表达进一步上升,当浓度为0.5μmol/L时,光密度值为0.2260±0.0691,与对照组比较,具有显著性差异( P < 0.01)。两药联合组p53蛋白的表达明显增强,OD值升高明显,即最低浓度(10-7mol/L)氯丙嗪与最低浓度(0.2μmol/L)顺铂联合作用后,OD值达到0.2560±0.0305,与对照组相比,具有极其显著性差异( P < 0.01)。与对应浓度顺铂处理Hela细胞的p53蛋白染色阳性细胞光密度值比较,存在统计学差异( P < 0.01)。结论:1在一定剂量和时间范围内,氯丙嗪可以抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖关系;并可诱导该细胞凋亡。2氯丙嗪对顺铂有协同作用。氯丙嗪联合顺铂可明显增加顺铂对Hela细胞的增殖抑制作用,使p53蛋白的表达明显上升。